Annexes de l'évaluation préalable finale concernant les souches

Bacillus amyloliquefaciens 13563-0
Bacillus atrophaeus 18250-7
Bacillus licheniformis American Type Culture Collection (ATCC) 12713
Bacillus subtilis ATCC 6051A (= ATCC 6051a)
Bacillus subtilis ATCC 55405
Bacillus subtilis sous-espèce subtilis ATCC 6051^T
Bacillus subtilis sous-espèce inaquosorum ATCC 55406
Espèce Bacillus 16970-5
Espèce Bacillus 2 18118-1
Espèce Bacillus 4 18121-4
Espèce Bacillus 7 18129-3

Environnement Canada
Santé Canada
Août 2015

Annexes

Annexe 1 : Morphologies des colonies des membres du groupe B. licheniformis/subtilis inscrit à la Liste intérieure des substances (LIS)
Annexe 2 : Caractéristique des membres du groupe B. licheniformis/subtilis - Analyse de la séquence génétique de l'acide ribonucléique (ARN) ribosomique 16S
Annexe 3 : Caractéristique des membres du groupe B. licheniformis/subtilis - Analyse de l'ester méthylique d'acide gras (EMAG)
Annexe 4 : Contenu cellulaire de certains acides gras
Annexe 5 : Liste de certains éléments mobiles et des caractéristiques connexes déterminés dans certains isolats des complexes B. subtilis
Annexe 6 : Gènes de virulence
Annexe 7 : Essais de virulence et de pathogénicité des souches de B. licheniformis/subtilis inscrites à la Liste intérieure des substances : activité hémolytique
Annexe 8 : Essais de virulence et de pathogénicité des souches de B. licheniformis/subtilis inscrites à la Liste intérieure des substances : production de catalase
Annexe 9 : Composé antimicrobien, autres métabolites et toxines produits par certains isolats du complexe B. subtilis
Annexe 10 : Essai de virulence et de pathogénicité des souches de B. licheniformis/subtilis inscrites à la Liste intérieure des substances : cytotoxicité
Annexe 11 : Résultats des essais de pathogénicité, de toxicité et d'irritation pour les souches du complexe B. subtilis menés sur les vertébrés, les invertébrés et les plantes terrestres et aquatiques
Annexe 12 : Essai de virulence et de pathogénicité des souches de B. licheniformis/subtilis inscrites à la LIS
Annexe 13 : Éclosions d'intoxication alimentaire
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Annexe 1 : Morphologies de colonies des membres du groupe B. licheniformis/subtilis inscrits à la Liste intérieure

Tableau A-1. Morphologies de colonies de la souche 13563-0 de *B. amyloliquefaciens*
Caractéristique	Gélose Tryptic Soy Broth (TSB) après sept jours de croissance à température de la piècea	Gélose de pomme de terre ou bouillon (Spizizen) (ATCC medium 423) à 37 °C vérifié après 24 heures (pour les milieux solides, ajouter 1,5 % de gélose)^{Note de bas de page Annexe A Tableau A1[a]}
Forme	Irrégulière	Irrégulière
Taille du diamètre (en mm)	5	5
Marge	Ondulée	Étalée, bords irréguliers
Élévation	Plate	Aucune donnée
Couleur/pigment	Blanc cassé	Blanc
Texture	Mate	Lisse, mate
Opacité	Opaque	Aucune donnée

Note de bas de page Annexe A Tableau A1 a

Données générées par la Direction générale de la santé environnementale et de la sécurité des consommateurs de Santé Canada.

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Tableau A-2. Morphologies de colonies de la souche 18250-7 de *B. atrophaeus*
Caractéristique	Gélose TSB après 24 heures de croissance à température de la pièce^{Note de bas de page Annexe A Tableau A2[a]}	Gélose TSB après sept jours de croissance à température de la pièce^[a]	Gélose nutritive à 30 °C pendant 24 heures^[a]	Gélose ou bouillon nutritif (ATCC medium no 3) à 30 °C après 24 heures dans des conditions aérobies^{Note de bas de page Annexe A Tableau A2[b]}	Gélose ou bouillon nutritif (ATCC medium no 3) à 30 °C après 24 heures dans des conditions aérobies^[b]	Gélose ou bouillon nutritif (ATCC medium no 3) à 30 °C après 24 heures dans des conditions aérobies^[b]
Forme	Circulaire	Irrégulière	Circulaire	Circulaire	Circulaire	Irrégulière
Taille du diamètre (en mm)	2	5-10	0,5	Aucune donnée	Aucune donnée	Aucune donnée
Marge	Entière	Ondulée	Entière	Entière	Entière	Ondulée
Élévation	Plate	Plate	Aucune donnée	Légèrement convexe	Légèrement convexe	Plate
Couleur/ pigmentationa	Blanc	Blanc cassé/beige	Blanc	Orange	Aucune donnée	Blanc
Texture	Lisse, humide	Lisse, humide	Aucune donnée	Brillante	Brillante	Aucune donnée
Opacité	Opaque	Opaque	Aucune donnée	Aucune donnée	Opaque	Aucune donnée

Note de bas de page Annexe A Tableau A2 a

Données générées par la Direction générale de la santé environnementale et de la sécurité des consommateurs de Santé Canada.

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Note de bas de page Annexe A Tableau A2 b

Description ATCC, plusieurs morphologies de colonies

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Tableau A-3. Morphologies de colonies de la souche ATCC 12713 de *B. licheniformis*
Caractéristique	Gélose TSB après sept jours de croissance à température de la pièce^{Note de bas de page Annexe A Tableau A3[a]},^{Note de bas de page Annexe A Tableau A3[b]}	Gélose TSB après sept jours de croissance à température de la pièce^[a][b]	Gélose nutritive à 30 °C pendant 24 heures^[a]	Gélose ou bouillon nutritif (ATCC medium no 3) à 30 °C pendant 24 heures dans des conditions aérobies^{Note de bas de page Annexe A Tableau A3[c]}	Gélose ou bouillon nutritif (ATCC medium no 3) à 30 °C pendant 24 heures dans des conditions aérobies^[c]
Forme	Circulaire	Irrégulière	Irrégulière	Aucune donnée	Irrégulière
Taille du diamètre (en mm)	5-7	5-7	2	Aucune donnée	Aucune donnée
Marge	Ondulée	Ondulée, lobée	Ondulée, filiforme	Aucune donnée	Aucune donnée
Élévation	Plate	Ombonée	Soulevée	Soulevée	Convexe
Couleur/pigment	Beige/blanc cassé	Beige/blanc cassé	Aucune donnée	Aucune donnée	Aucune donnée
Texture	Humide, lisse	Ridée, sèche	Sèche	Sèche, ridée	Mucoïde
Opacité	Semi-translucide	Opaque	Opaque	Aucune donnée	Aucune donnée

Note de bas de page Annexe A Tableau A3 a

Données générées par la Direction générale de la santé environnementale et de la sécurité des consommateurs de Santé Canada.

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Note de bas de page Annexe A Tableau A3 b

Les colonies s'accrochent à la gélose; plusieurs morphologies de colonies

Retour à la note de page Annexe A Tableau A3b

Note de bas de page Annexe A Tableau A3c

Description ATCC, plusieurs morphologies de colonies

Retour à la note de page Annexe A Tableau A3 c

Tableau A-4. Morphologies de colonies de la souche ATCC 6051A de *B. subtilis*
Caractéristique	Gélose TSB après sept jours de croissance à température de la pièce^{Note de bas de page Annexe A Tableau A4[a]}	Gélose nutritive à 30 °C pendant 24 heures^[a]	Gélose ou bouillon nutritif (ATCC medium no 3) à 30 °C vérifié après 24 heures et jusqu'à une semaine dans des conditions aérobies^{Note de bas de page Annexe A Tableau A4[b]}	Gélose ou bouillon nutritif (ATCC medium no 3) à 30 °C vérifié après 24 heures et jusqu'à une semaine dans des conditions aérobies^[b]
Forme	Circulaire à irrégulière	Irrégulière	Irrégulière et étalée avec l'âge	Irrégulière et étalée avec l'âge
Taille du diamètre (en mm)	6 à 25	2	Plus grande	Plus petite
Marge	Ondulée	Entière	Érodée	Entière
Élévation	Plate	Plate	Plate	Plate
Couleur/pigment	Blanc cassé	Blanc cassé	Beige/crème	Beige/crème
Texture	Humide	Sèche	Mate, plus dure	Mate, plus lisse
Opacité	Translucide	Semi-translucide	Opaque	Opaque

Note de bas de page Annexe A Tableau A4 a

Données générées par la Direction générale de la santé environnementale et de la sécurité des consommateurs de Santé Canada.

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Note de bas de page Annexe A Tableau A4 a

Description ATCC, plusieurs morphologies de colonies

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Tableau A-5. Morphologies de colonies de la souche ATCC 55405 de *B. subtilis*
Caractéristique	Gélose TSB après sept jours de croissance à température de la pièce^{Note de bas de page Annexe A Tableau A5[a]},^{Note de bas de page Annexe A Tableau A5[b]}	Gélose TSB après sept jours de croissance à température de la pièce^[a][b]	Gélose TSB après sept jours de croissance à température de la pièce^[a][b]	Gélose nutritive à 30 °C pendant 24 heures^[a]	Gélose ou bouillon nutritif (ATCC medium no 3 à 30 °C vérifié après 24 heures et jusqu'à une semaine dans des conditions aérobies^{Note de bas de page Annexe A Tableau A5[c]}
Forme	Irrégulière à circulaire	Circulaire	Irrégulière à circulaire	2	Circulaire
Taille du diamètre (en mm)	4	4	4	Aucune donnée	Aucune donnée
Marge	Entière	Ondulée	Lobée	Entière	Entière
Élévation	Convexe	Plate	Soulevée	Convexe	Convexe
Couleur/pigment	Incolore à blanc cassé	Blanc cassé	Blanc	Incolore	Aucune donnée
Texture	Brillante, mucoïde	Mate, sèche	Plate, fragile, sèche	Mucoïde	Mucoïde, brillante
Opacité	Opaque	Translucide à opaque	Opaque	Aucune donnée	Opaque

Note de bas de page Annexe A Tableau A5 a

Données générées par la Direction générale de la santé environnementale et de la sécurité des consommateurs de Santé Canada.

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Note de bas de page Annexe A Tableau A5 b

Plusieurs morphologies de colonies

Retour à la note de page Annexe A Tableau A5b

Note de bas de page Annexe A Tableau A5 c

Description ATCC

Retour à la note de page Annexe A Tableau A5c

Tableau A-6. Morphologies de colonies de la souche ATCC 6051 de *B. subtilis* sous-espèce *subtilis*
Caractéristique	Gélose TSB après sept jours de croissance à température de la pièce^{Note de bas de page Annexe A Tableau A6[a]}	Gélose nutritive à 30 °C pendant 24 heures^[a]	Gélose ou bouillon nutritif (ATCC medium no 3) à 30 °C vérifié après 24 heures et jusqu'à une semaine dans des conditions aérobies^{Note de bas de page Annexe A Tableau A6[b]}	Gélose ou bouillon nutritif (ATCC medium no 3) à 30 °C vérifié après 24 heures et jusqu'à une semaine dans des conditions aérobies^[b]
Forme	Irrégulière	Irrégulière	Circulaire	Irrégulière
Taille du diamètre (en mm)	20	Aucune donnée	Aucune donnée	Aucune donnée
Marge	Ondulée	Ondulée	Entière	Aucune donnée
Élévation	Soulevée	Aucune donnée	Légèrement convexe	Plate
Couleur/pigment	Blanc cassé	Blanc cassé	Aucune donnée	Aucune donnée
Texture	Sèche	Aucune donnée	Brillante	Dure
Opacité	Opaque	Opaque	Opaque	Opaque

Note de bas de page Annexe A Tableau A6 a

Données générées par la Direction générale de la santé environnementale et de la sécurité des consommateurs de Santé Canada.

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Note de bas de page Annexe A Tableau A6 b

Description ATCC, plusieurs morphologies de colonies

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Tableau A-7. Morphologies de colonies de la souche ATCC 55406 de *B. subtilis* sous-espèce *inaquosorum*
Caractéristique	Gélose TSB après sept jours de croissance à température de la pièce^{Note de bas de page Annexe A Tableau A7[a]},^{Note de bas de page Annexe A Tableau A7[b]}	Gélose nutritive à 30 °C pendant 24 heures^[a]	Gélose nutritive (ATCC medium no 3) à 30 °C vérifiée à 24 heures^{Note de bas de page Annexe A Tableau A7[c]},^{Note de bas de page Annexe A Tableau A7[d]}	Gélose nutritive (ATCC medium no 3) à 30 °C vérifiée à 24 heures^[c][d]
Forme	Circulaire	Irrégulière	Circulaire	Circulaire
Taille du diamètre (en mm)	5	1	Aucune donnée	Aucune donnée
Marge	Ondulée	Aucune donnée	Érodée	Aucune donnée
Élévation	Plate	Aucune donnée	Plate	Aucune donnée
Couleur/pigment	Blanc	Incolore	Crème	Blanc
Texture	Mate	Aucune donnée	Aucune donnée	Lisse
Opacité	Opaque	Opaque	Opaque	Opaque

Note de bas de page Annexe A Tableau A7 a

Données générées par la Direction générale de la santé environnementale et de la sécurité des consommateurs de Santé Canada.

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Note de bas de page Annexe A Tableau A7 b

Croissance des colonies dans la gélose

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Note de bas de page Annexe A Tableau A7 c

Description ATCC, plusieurs morphologies de colonies

Retour à la note de page Annexe A Tableau A7c

Note de bas de page Annexe A Tableau A7 d

Les colonies creusent dans la gélose; cet organisme se développe mieux sur des milieux solides que dans un bouillon

Retour à la note de page Annexe A Tableau A7d

**Tableau A-8. Morphologies de colonies de l'espèce *Bacillus* 16970-5**
Caractéristique	Gélose TSB après sept jours de croissance à température de la pièce^{Note de bas de page Annexe A Tableau A8[a]}	Gélose nutritive à 30 °C pendant 24 heures^[a]	Gélose ou bouillon nutritif (ATCC medium no 3) à 30 °C vérifié après 24 heures et jusqu'à une semaine dans des conditions aérobies^{Note de bas de page Annexe A Tableau A8[b]}
Forme	Irrégulière	Irrégulière	Circulaire
Taille du diamètre (en mm)	12 à 20	2	Aucune donnée
Marge	Ondulée	Aucune donnée	Certaines avec des marges lobées
Élévation	Plate	Plate	Aucune donnée
Couleur	Blanc cassé	Blanc cassé	Aucune donnée
Texture	Mate	Sèche	Brillante, lisse
Opacité	Opaque	Opaque	Opaque

Note de bas de page Annexe A Tableau A8 a

Données générées par la Direction générale de la santé environnementale et de la sécurité des consommateurs de Santé Canada.

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Note de bas de page Annexe A Tableau A8 b

Description ATCC

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**Tableau A-9. Morphologies de colonies de l'espèce *Bacillus* 2 18118-1**
Caractéristique	Gélose TSB après sept jours de croissance à température de la pièce^{Note de bas de page Annexe A Tableau A9[a]}	Gélose de pomme de terre ou bouillon (Spizizen) (ATCC medium 423) à 37 °C vérifié après 24 heures (pour les milieux solides, ajouter 1,5 % de gélose)^[a]	Gélose de pomme de terre ou bouillon (Spizizen) (ATCC medium 423) à 37 °C vérifié après 24 heures (pour les milieux solides, ajouter 1,5 % de gélose)^{Note de bas de page Annexe A Tableau A9[b]}	Gélose de pomme de terre ou bouillon (Spizizen) (ATCC medium 423) à 37 °C vérifié après 24 heures (pour les milieux solides, ajouter 1,5 % de gélose)^[b]
Forme	Irrégulière	Circulaire	Circulaire	Aucune donnée
Taille du diamètre (en mm)	5-12	5	Aucune donnée	Aucune donnée
Marge	Ondulée	Bords légèrement irréguliers	Légèrement irrégulière	Étalement lisse, bords irréguliers
Élévation	Ombonée, soulevée	Aucune donnée	Aucune donnée	Aucune donnée
Couleur/pigment	Blanchâtre	Aucune donnée	Aucune donnée	Aucune donnée
Texture	Humide, brillante et mate	Aucune donnée	Lisse, brillante	Brillante, centre lisse
Opacité	Opaque	Opaque	Opaque	Aucune donnée

Note de bas de page Annexe A Tableau A9 a

Données générées par la Direction générale de la santé environnementale et de la sécurité des consommateurs de Santé Canada.

Retour à la note de page Annexe A Tableau A9a

Note de bas de page Annexe A Tableau A9 b

Description ATCC, plusieurs morphologies de colonies

Retour à la note de page Annexe A Tableau A9b

**Tableau A-10. Morphologies de colonies de l'espèce *Bacillus* 4 18121-4**
Caractéristique	Gélose TSB après sept jours de croissance à température de la pièce^{Note de bas de page Annexe A Tableau A10[a]}	Gélose TSB après sept jours de croissance à température de la pièce^[a]	Gélose nutritive à 30 °C pendant 24 heures^[a]	Gélose ou bouillon nutritif (ATCC medium no 3) à 37 °C pendant 24 heures dans des conditions aérobies^{Note de bas de page Annexe A Tableau A10[b]}	Gélose ou bouillon nutritif (ATCC medium no 3) à 37 °C pendant 24 heures dans des conditions aérobies^[b]
Forme	Circulaire	Elliptique	Irrégulière	Irrégulière	Rhizoïde
Taille du diamètre (en mm)	5-7	5-7	2	Aucune donnée	Aucune donnée
Marge	Ondulée	Ondulée	Ondulée, filiforme	Ondulée	Filamenteuse
Élévation	Imparfaite, ombonée	Plate	Soulevée	Convexe	Soulevée
Couleur	Beige/blanc cassé	Beige/blanc cassé	Aucune donnée	Translucide	Aucune donnée
Texture	Humide	Mate	Sèche	Lisse, brillante	Dure
Opacité	Opaque	Opaque	Opaque	Aucune donnée	Opaque

Note de bas de page Annexe A Tableau A10 a

Données générées par la Direction générale de la santé environnementale et de la sécurité des consommateurs de Santé Canada.

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Note de bas de page Annexe A Tableau A10 b

Description ATCC, plusieurs morphologies de colonies

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**Tableau A-11. Morphologies de colonies de l'espèce *Bacillus* 7 18129-3**
Caractéristique	Gélose TSB après sept jours de croissance à température de la pièce^{Note de bas de page Annexe A Tableau A11[a]}	Gélose nutritive à 30 °C pendant 24 heures^[a]	Gélose ou bouillon nutritif (ATCC medium no 3) à 30 °C vérifié après 24 heures et jusqu'à une semaine dans des conditions aérobies^{Note de bas de page Annexe A Tableau A11[b]}	Gélose ou bouillon nutritif (ATCC medium no 3) à 30 °C vérifié après 24 heures et jusqu'à une semaine dans des conditions aérobies^[b]
Forme	Irrégulière	Irrégulière	Circulaire	Irrégulière
Taille du diamètre (en mm)	20	Aucune donnée	Aucune donnée	Aucune donnée
Marge	Ondulée	Ondulée	Entière	Aucune donnée
Élévation	Soulevée	Aucune donnée	Légèrement convexe	Plate
Couleur	Blanc cassé	Blanc cassé	Aucune donnée	Aucune donnée
Texture	Sèche	Aucune donnée	Brillante	Dure
Opacité	Opaque	Opaque	Opaque	Opaque

Note de bas de page Annexe A Tableau A11 a

Données générées par la Direction générale de la santé environnementale et de la sécurité des consommateurs de Santé Canada.

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Note de bas de page Annexe A Tableau A11 b

Description ATCC, plusieurs morphologies de colonies

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Annexe 2 : Caractéristique des membres du groupe B. licheniformis/subtilis – Analyse de la séquence du gène de l'ARN ribosomique 16S

Données sur la séquence du gène de l'ARN ribosomique 16S générées par la Direction générale de la santé environnementale et de la sécurité des consommateurs de Santé Canada. Des polymorphismes de la longueur des fragments de restriction au sein de la région V3 et entre les régions V4 et V5 ont été définis selon Jeyaram et al., 2011. Les séquences génétiques de l'ARN ribosomique 16S ont été comparées à la version 11 du projet Ribosomal Database (https://rdp.cme.msu.edu/) et dix correspondances principales se distinguent. Le principal format de correspondance était le suivant : code d'identification, cote de similitude (si la source de référence est précisée), coefficient obtenu grâce à la méthode SAB, oligomères communs uniques et nom complet de la séquence.

**Tableau A 12. Résultats de l'analyse de la séquence du gène de l'ARN ribosomique 16S de la souche 13563-0 de *B. amyloliquefaciens*^{Note de bas de page Annexe 2 Tableau A-12 [a]}**
Identification abrégée	Indice de similarité	Indice S_ab	Oligomères uniques communs	Nom complet de la séquence
S001153538	1.000	1.000	1364	Bacillus sp. XI; EU779996
S001550906	1.000	1.000	1371	Bacillus subtilis; Y2; GQ148813
S001588402	1.000	1.000	1374	Bacillus amyloliquefaciens; PBT; FJ169495
S001745899	1.000	1.000	1393	Bacillus amyloliquefaciens; IMAU80205; GU125623
S002038639	1.000	1.000	1354	Bacillus amyloliquefaciens; HK1; AB279736
S002222255	1.000	1.000	1447	Bacillus amyloliquefaciens; DSM 7; DSM7; FN597644
S002222257	1.000	1.000	1447	Bacillus amyloliquefaciens; DSM 7; DSM7; FN597644
S002222259	1.000	1.000	1447	Bacillus amyloliquefaciens; DSM 7; DSM7; FN597644
S002222261	1.000	1.000	1447	Bacillus amyloliquefaciens; DSM 7; DSM7; FN597644
S002222263	1.000	1.000	1447	Bacillus amyloliquefaciens; DSM 7; DSM7; FN597644

Note de bas de page Annexe 2 Tableau A12 a

Le site HinfI est présent et les sites RsaI sont absents, ce qui signifie qu'il s'agit de l'espèce B. amyloliquefaciens et non de l'espèce B. subtilis, à laquelle elle est étroitement apparentée (Jeyaram et al., 2011.

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**Tableau A-13. Résultats de l'analyse de la séquence du gène de l'ARN ribosomique 16S de la souche 18250-7 de *B. atrophaeus*^{Note de bas de page Annexe 2 Tableau A-13 [a]}**
Identification abrégée	Indice de similarité	Indice S_ab	Oligomères uniques communs	Nom complet de la séquence
S000382399	Non calculé	1.000	1432	Bacillus sp.; SSA3; AB017587
S000644416	Non calculé	1.000	1436	Bacillus atrophaeus; SCH0408; AY881241
S000980555	Non calculé	1.000	1337	Bacillus atrophaeus; K01-03; EU326483
S001872424	Non calculé	1.000	1411	Bacillus subtilis; JAM A-6-10; AB542912
S002035172	Non calculé	1.000	1375	Bacillus atrophaeus; NMTD54; GU568183
S002035195	Non calculé	1.000	1379	Bacillus atrophaeus; GBSC56; GU568206
S002166857	Non calculé	1.000	1376	Bacillus atrophaeus; RJGP16; GU969134
S002167105	Non calculé	1.000	1372	Bacillus atrophaeus; LSSC3; GU994860
S002221550	Non calculé	1.000	1464	Bacillus atrophaeus 1942; CP002207
S002221552	Non calculé	1.000	1464	Bacillus atrophaeus 1942; CP002207

Note de bas de page Annexe 2 Tableau A13 a

La séquence du gène de l'ARN ribosomique de la souche 18250-7 de B. atrophaeus correspond à celle des souches B. atrophaeus et Bacillus sp. De plus, le site HinfI est présent pour le groupe B. subtilis/licheniformis (Jeyaram et al., 2011).

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**Tableau A-14: Résultats de l'analyse de la séquence du gène de l'ARN ribosomique 16S de la souche ATCC 12713 de *B. licheniformis*^{Note de bas de page Annexe 2 Tableau A-14 [a]}**
Identification abrégée	Indice de similarité	Indice S_ab	Oligomères uniques communs	Nom complet de la séquence
S000392549	Non calculé	1.000	1427	Bacillus licheniformis; Mo1; AF372616
S000615411	Non calculé	1.000	1409	Bacillus licheniformis; ACO1; DQ228696
S000647676	Non calculé	1.000	1421	Bacillus licheniformis; K19; DQ351932
S000736754	Non calculé	1.000	1448	Bacillus licheniformis; BCRC 15413; DQ993676
S000752038	Non calculé	1.000	1409	Bacillus licheniformis; EF059752
S000824918	Non calculé	1.000	1422	Bacillus licheniformis; BCRC 12826; EF423608
S000843501	Non calculé	1.000	1442	Bacillus sp. J24; EF471917
S000901702	Non calculé	1.000	1389	Bacillus licheniformis; NBRC 12107; AB354236
S000941823	Non calculé	1.000	1389	Bacillus licheniformis; NBRC 12202; AB363734
S001153503	Non calculé	1.000	1319	Bacillus licheniformis; SVD1; EU770587

Note de bas de page Annexe 2 Tableau A14 a

La séquence du gène de l'ARN ribosomique 16S de la souche ATCC 12713 de Bacillus licheniformis correspond principalement à celle de B. licheniformis. Le profil RFLP (sites RsaI dans la région V3; site Hinfl et Cfol entre les régions V4 et V5) est conforme à celui de B. licheniformis sp. (Jeyaram et al., 2011).

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**Tableau A-15: Résultats de l'analyse de la séquence du gène de l'ARN ribosomique 16S de la souche ATCC 6051A de *B. subtilis*^{Note de bas de page Annexe 2 Tableau A-15 [a]}**
Identification abrégée	Indice de similarité	Indice S_ab	Oligomères uniques communs	Nom complet de la séquence
S000003473	Non calculé	1.000	1423	Bacillus subtilis (T); DSM10; AJ276351
S000365537	Non calculé	1.000	1446	Bacillus sp. TUT1206; AB188212
S000383767	Non calculé	1.000	1412	Bacillus sp. CH4-4; AB055846
S000383768	Non calculé	1.000	1412	Bacillus sp. CH4-5; AB055848
S000383769	Non calculé	1.000	1412	Bacillus sp. CH15-2; AB055849
S000383770	Non calculé	1.000	1412	Bacillus sp. CH19-3; AB055850
S000383771	Non calculé	1.000	1412	Bacillus sp. CH20-1; AB055851
S000383772	Non calculé	1.000	1412	Bacillus sp. CH7-1; AB055852
S000383773	Non calculé	1.000	1412	Bacillus sp. CH10-1; AB055853
S000434646	Non calculé	1.000	1401	Bacillus subtilis; KL-073; AY030330

Note de bas de page Annexe 2 Tableau A15 a

La séquence du gène de l'ARN ribosomique 16S de la souche ATCC 6051A de B. subtilis correspond à celle des espèces Bacillus subtilis et Bacillus sp. Le profil RFLP (sites RsaI dans la région V3; site HinfI entre les régions V4 et V5) est conforme à celui de B. subtilis sp. (Jeyaram et al., 2011). Toutefois, le premier site Rsal putatif doit être vérifié, car il contient une base ambiguë (le pic dominant semble correspondre à une A).

Retour à la note de page Annexe 2 Tableau A15 a referrer

**Tableau A-16: Résultats de l'analyse de la séquence génétique de l'ARN ribosomique 16S de la souche ATCC 55405 de *B. subtilis*^{Note de bas de page Annexe 2 Tableau A-16 [a]}**
Identification abrégée	Indice de similarité	Indice S_ab	Oligomères uniques communs	Nom complet de la séquence
S000870716	Non calculé	1.000	1391	Bacillus amyloliquefaciens; NBRC 14141; AB325582
S001745899	Non calculé	1.000	1393	Bacillus amyloliquefaciens; IMAU80205; GU125623
S002038639	Non calculé	1.000	1354	Bacillus amyloliquefaciens; HK1; AB279736
S002222255	Non calculé	1.000	1447	Bacillus amyloliquefaciens DSM 7; DSM7; FN597644
S002222257	Non calculé	1.000	1447	Bacillus amyloliquefaciens DSM 7; DSM7; FN597644
S002222259	Non calculé	1.000	1447	Bacillus amyloliquefaciens DSM 7; DSM7; FN597644
S002228859	Non calculé	1.000	1224	Bacillus amyloliquefaciens; BAC3048; HM355639
S003280603	Non calculé	1.000	1329	Bacillus amyloliquefaciens; BSS5; JQ407053
S003285855	Non calculé	1.000	1305	Bacillus sp. SE18; JQ714100
S003313087	Non calculé	1.000	1342	Bacillus amyloliquefaciens; KU-8; JQ696827

Note de bas de page Annexe 2 Tableau A16 a

La séquence du gène de l'ARN ribosomique 16S de la souche ATCC 55405 de B. subtilis correspond principalement à celle de B. amyloliquefaciens et le profil RFLP de l'enzyme HinfI concorde avec celui de B. amyloliquefaciens (Jeyaram et al., 2011).

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Tableau A-17. Résultats de l'analyse de la séquence du gène de l'ARN ribosomique 16S de la souche ATCC 6051 de *B. subtilis* sous-espèce *Subtilis*^{Note de bas de page Annexe 2 Tableau A-17 [a]}
Identification abrégée	Indice de similarité	Indice S_ab	Oligomères uniques communs	Nom complet de la séquence
S000398967	Non calculé	1.000	1383	Bacillus subtilis; BHP6-1; AY162131
S001020073	Non calculé	1.000	1422	Bacillus subtilis; B1-33; EU435361
S001096330	Non calculé	1.000	1435	Bacillus sp. zh161; EU526087
S002038710	Non calculé	1.000	1388	Bacillus sp. PT401; AB374305
S002199724	Non calculé	1.000	1420	Bacillus sp. non cultivé; CapF3B.16; HM152583
S002199742	Non calculé	1.000	1386	Bacillus sp. non cultivé; Filt.13; HM152601
S002199744	Non calculé	1.000	1386	Bacillus sp. non cultivé; Filt.15; HM152603
S002199761	Non calculé	1.000	1386	Bacillus sp. non cultivé; Filt.32; HM152620
S002199769	Non calculé	1.000	1385	Bacillus sp. non cultivé; Filt.40; HM152628
S002199775	Non calculé	1.000	1386	Bacillus sp. non cultivé; Filt.46; HM152634

Note de bas de page Annexe 2 Tableau A17 a

La séquence du gène de l'ARN ribosomique 16S de l'espèce Bacillus 6051 correspond à celle de Bacillus subtilis et de Bacillus sp. Le profil RFLP (deux sites RsaI dans la région V3; site HinfI entre les régions V4 et V5) est conforme à celui de B. subtilis sp. (Jeyaram et al., 2011).

Retour à la note de page Annexe 2 Tableau A17 a referrer

**Tableau A-18. Résultats de l'analyse de la séquence du gène de l'ARN ribosomique 16S de la souche ATCC 55406 de *B. subtilis*^{Note de bas de page Annexe 2 Tableau A-18 [a]}**
Identification abrégée	Indice de similarité	Indice S_ab	Oligomères uniques communs	Nom complet de la séquence
S001020073	Non calculé	0.946	1422	Bacillus subtilis; B1-33; EU435361
S001096330	Non calculé	0.946	1435	Bacillus sp. zh161; EU526087
S002038710	Non calculé	0.946	1388	Bacillus sp. PT401; AB374305
S002199724	Non calculé	0.946	1420	Bacillus sp. non cultivé; CapF3B.16; HM152583
S002199860	Non calculé	0.946	1421	Bacillus sp. non cultivé; Filt.132; HM152719
S002199880	Non calculé	0.946	1421	Bacillus sp. non cultivé; Filt.152; HM152739
S002410934	Non calculé	0.946	1413	Bacillus subtilis; MB5 NIOT; HQ858061
S003257857	Non calculé	0.946	1446	Bacillus subtilis subsp. inaquosorum; souche type : DSM 22148; HE582781
S003261902	Non calculé	0.946	1388	Bacillus subtilis; NBRC 3108; AB680011
S003264071	Non calculé	0.946	1388	Bacillus subtilis; NBRC 104440; AB682180

Note de bas de page Annexe 2 Tableau A18 a

Les correspondances de l'ARN 16S pour la souche ATCC 55406 de B. subtilis sous-espèce inaquosorum incluaient Bacillus sp. et B. subtilis sous-espèce inaquosorum. Le profil de restriction de la souche ATCC 55406 de B. subtilis sous-espèce inaquosorum est différent de celui de B. licheniformis, corroborant l'argument selon lequel l'espèce a été mal nommée.

Retour à la note de page Annexe 2 Tableau A18 a referrer

**Tableau A-19. Résultats de l'analyse de la séquence du gène de l'ARN ribosomique 16S de l'espèce Bacillus 16970-5**
Les résultats de l'analyse de la séquence du gène de l'ARN ribosomique 16S confirment l'identité de cette souche telle qu'établie lors de son inscription à la Liste intérieure. Cependant, en raison des demandes de confidentialité, l'identité de l'espèce Bacillus 16970-5 et les correspondances présentant les plus fortes similitudes établies à l'aide de la Ribosomal Database ne peuvent être divulguées.

**Tableau A-20. Résultats de l'analyse de la séquence du gène de l'ARN ribosomique 16S de l'espèce *Bacillus* 2 18118-1**
Les résultats de l'analyse de la séquence du gène de l'ARN ribosomique 16S confirment l'identité de cette souche telle qu'établie lors de son inscription à la Liste intérieure. Cependant, en raison des demandes de confidentialité, l'identité de l'espèce Bacillus 2 18118-1 et les correspondances présentant les plus fortes similitudes établies à l'aide de la Ribosomal Database ne peuvent être divulguées.

**Tableau A-21: Résultats de l'analyse de la séquence du gène de l'ARN ribosomique 16S de l'espèce *Bacillus* 4 18121-4**
Les résultats de l'analyse de la séquence du gène de l'ARN ribosomique 16S confirment l'identité de cette souche telle qu'établie lors de son inscription à la Liste intérieure. Cependant, en raison des demandes de confidentialité, l'identité de l'espèce Bacillus 4 18121-4 et les correspondances présentant les plus fortes similitudes établies à l'aide de la Ribosomal Database ne peuvent être divulguées.

**Tableau A-22. Résultats de l'analyse de la séquence du gène de l'ARN ribosomique 16S de l'espèce *Bacillus* 7 18129-3**
Les résultats de l'analyse de la séquence du gène de l'ARN ribosomique 16S confirment l'identité de cette souche telle qu'établie lors de son inscription à la Liste intérieure. Cependant, en raison des demandes de confidentialité, l'identité de l'espèce Bacillus 7 18129-3 et les correspondances présentant les plus fortes similitudes établies à l'aide de la Ribosomal Database ne peuvent être divulguées.

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Annexe 3 : Caractéristiques des membres du groupe B. licheniformis/subtilis - Analyse des esters méthyliques d'acides gras (EMAG)

Les données générées par la Direction générale de la santé environnementale et de la sécurité des consommateurs de Santé Canada indiquent la meilleure correspondance entre l'échantillon et les bases de données MIDI environnementales et cliniques, ainsi que l'indice de similarité du profile d'acide gras (moyenne de l'ensemble des correspondances) et le nombre de correspondances (nombre de correspondances/nombre total de tests, parenthèses). Pour obtenir des méthodes et des renseignements supplémentaires, consultez le site Web MIDI Labs. En règle générale, les échantillons qui se regroupent au sein d'une distance euclidienne de 2,5, 6 et 10 sont ceux qui proviennent de la même souche, de la même sous-espèce et de la même espèce, respectivement.

Tableau A-23. Analyse des EMAG de la souche 13563-0 de *B. amyloliquefaciens*
Environnementale	Clinique
B. amyloliquefaciens 0,598 (10/15) (groupe B. subtilis)	B. subtilis 0,735 (12/17) CG sous-groupe A
B. subtilis 0,441 (3/15)	B. subtilis 0,729 (5/17) CG sous-groupe B
B. atrophaeus 0,801 (1/15) CG sous-groupe A	Sans objet
Staphylococcus lutrae 0,490 (1/15) (coag+)	Sans objet

**Tableau A-24. Analyse des EMAG de la souche *B. atrophaeus* 18250-7**
Environnementale	Clinique
B. atrophaeus 0,877 (6/10)	B. atrophaeus 0,814 (5/6) CG sous-groupe B
L'analyse ne convient pas suffisamment (4/10) pour la recherche en bibliothèque	B. atrophaeus 0,853 (1/6) CG sous-groupe A

Tableau A-25. Analyse des EMAG de la souche ATCC 12713 de *B. licheniformis*
Environnementale	Clinique
B. licheniformis 0808 (13/14) (groupe B. subtilis)	B. licheniformis 0,674 (6/17) (groupe B. subtilis)
B. megaterium 0,719 (1/14) CG sous-groupe A	Staphylococcus schleiferi 0,418 (6/17)
Sans objet	B. pumilis - CG sous-groupe A 0,669 (2/17)
Sans objet	B. pumilis - CG sous-groupe B 0,468 (2/17)
Sans objet	B. subtilis 0,233 (1/17)

Tableau A-26. Analyse des EMAG de la souche ATCC 6051A de *B. subtilis*
Environnementale	Clinique
B. subtilis 0,876 (16/17)	B. subtilis 0,872 (13/13)
B. amyloliquefaciens 0,798 (1/17)	Sans objet

Tableau A-27. Analyse des EMAG de la souche ATCC 55405 de *B. subtilis*
Environnementale	Clinique
B. subtilis 0,753 (10/15)	B. subtilis 0,662 (12/12)
B. amyloliquefaciens 0,736 (5/15) (groupe B. subtilis)	Sans objet

**Tableau A-28. Analyse des EMAG de la souche ATCC 6051de B. subtilis sous-espèce subtilis**
Environnementale	Clinique
B. subtilis 0,911 (14/14)	B. subtilis 0,760 (9/12)
Sans objet	L'analyse ne convient pas suffisamment 2/12 pour la recherche en bibliothèque
Sans objet	Micrococcus lylae 0,292 (1/12) CG sous-groupe B

**Tableau A-29. Analyse des EMAG de la souche ATCC 55406 de *B. subtilis* sous-espèce inaquosorum**
Environnementale	Clinique
B. subtilis 0,803 (10/25)	B. subtilis 0,727 (12/12)
B. amyloliquefaciens 0,793 (9/25) (groupe B. subtilis)	Sans objet
B. megaterium 0,602 (4/25) CG sous-groupe A	Sans objet
Pas de correspondance 2/25	Sans objet

**Tableau A-30. Analyse des EMAG de l'espèce *Bacillus* 16970-5**
Environnementale	Clinique
Les résultats produits à partir de la base de données environnementale associée à l'analyse des EMAG confirment l'identité de cette souche qui avait été établie lorsqu'elle a été inscrite à la Liste intérieure. Cependant, en raison des demandes de confidentialité, l'identité de l'espèce Bacillus 16970-5 ne peut être divulguée.	Les résultats produits à partir de la base de données environnementale associée à l'analyse des EMAG confirment l'identité de cette souche qui avait été établie lorsqu'elle a été inscrite à la Liste intérieure. Cependant, en raison des demandes de confidentialité, l'identité de l'espèce Bacillus 16970-5 ne peut être divulguée.

**Tableau A-31. Analyse des EMAG de l'espèce *Bacillus* 2 18118-1**
Environnementale	Clinique
Les résultats produits à partir de la base de données environnementale associée à l'analyse des EMAG confirment l'identité de cette souche qui avait été établie lorsqu'elle a été inscrite à la Liste intérieure. Cependant, en raison des demandes de confidentialité, l'identité de l'espèce Bacillus 2 18118-1 ne peut être divulguée.	Les résultats produits à partir de la base de données environnementale associée à l'analyse des EMAG confirment l'identité de cette souche qui avait été établie lorsqu'elle a été inscrite à la Liste intérieure. Cependant, en raison des demandes de confidentialité, l'identité de l'espèce Bacillus 2 18118-1 ne peut être divulguée.

**Tableau A-32. Analyse des EMAG de l'espèce *Bacillus* 4 18121-4**
Environnementale	Clinique
Les résultats produits à partir de la base de données environnementale associée à l'analyse des EMAG confirment l'identité de cette souche qui avait été établie lorsqu'elle a été inscrite à la Liste intérieure. Cependant, en raison des demandes de confidentialité, l'identité de l'espèce Bacillus 4 18121-4 ne peut être divulguée.	Les résultats produits à partir de la base de données clinique associée à l'analyse des EMAG confirment l'identité de cette souche qui avait été établie lorsqu'elle a été inscrite à la Liste intérieure. Cependant, en raison des demandes de confidentialité, l'identité de l'espèce Bacillus 4 18121-4 ne peut être divulguée.

**Tableau A-33. Analyse des EMAG de l'espèce *Bacillus* 7 18129-3**
Environnementale	Clinique
Les résultats produits à partir de la base de données environnementale associée à l'analyse des EMAG confirment l'identité de cette souche qui avait été établie lorsqu'elle a été inscrite à la Liste intérieure. Cependant, en raison des demandes de confidentialité, l'identité de l'espèce Bacillus 7 18129-3 ne peut être divulguée.	Les résultats produits à partir de la base de données environnementale associée à l'analyse des EMAG confirment l'identité de cette souche qui avait été établie lorsqu'elle a été inscrite à la Liste intérieure. Cependant, en raison des demandes de confidentialité, l'identité de l'espèce Bacillus 7 18129-3 ne peut être divulguée.

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Annexe 4 : Contenu cellulaire de certains acides gras

**Tableau A-34. Contenu cellulaire de certains acides gras chez les membres du groupe *B. licheniformis/subtilis*^{Note de bas de page Annexe 4 Tableau A34[a]}**
Souche inscrite à la LIS	C16:O (%)	Iso-C17:1ω10c (%)
B. amyloliquefaciens 13563-0	3,17	2,4
B. atrophaeus 18250-7	3,07	1,5
B. licheniformis ATCC 12713	2,89	1,56
B. subtilis sous-espèce subtilis ATCC 6051	4,34	1,95
B. subtilis ATCC 6051A	2,55	2,65
B. subtilis ATCC 55405	3,05	2,34
B. subtilis sous-espèce inaquosorum ATCC 55406	3.3	1,16
Espèce Bacillus 16970-5	3,52	1,81
Espèce Bacillus 2 18118-1	6,09	1,77
Espèce Bacillus 4 18121-4	3,41	1.11
Espèce Bacillus 7 18129-3	4,34	1,95

Note de bas de page Annexe 4 Tableau A34 a

Données non publiées générées par la Direction générale de la santé environnementale et de la sécurité des consommateurs de Santé Canada.

Retour à la note de page Annexe 4 Tableau A34a

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Annexe 5 : Liste de certains éléments mobiles et des caractéristiques connexes identifiées dans certains isolats du complexe B. subtilis

Tableau A-35. Liste de certains éléments mobiles et des caractéristiques connexes identifiées chez certaines souches de *B. licheniformis*
Nom de l'élément	Caractéristiques connexes	Références
Plasmide (nom inconnu)	Résistance au diméthoate et gènes supplémentaires pour une résistance aux antibiotiques et aux métaux lourds Na, Er, Ch, Cz, Cf, Ba2+ et Zn2+)	(Mandal et al., 2005)
Plasmide (pBL1, pBL10, pBL2)	Non precise	(Zawadzki et al., 1996)
Élément d'insertion (IS3Bli1)	Code deux séquences codantes de protéines de recouvrement prévues, désignées par orfA et orfB dans les cadres de lecture traductionnel de 0 et 1. Huit de ces éléments se trouvent dans les régions intergéniques et l'un d'entre eux interrompt le gène comP	(Rey et al., 2004)
Séquences de la prophase (NZP1 et NZP3)	Codes pour la grande sous-unité de l'enzyme terminase, une signature protéique fortement conservée parmi les prophages	(Rey et al., 2004)

Tableau A-36. Liste de certains éléments mobiles et des caractéristiques connexes identifiées chez certaines souches de *B. subtilis*
Nom de l'élément	Caractéristiques connexes	Références
Transposon (Tn917)	Utilisé dans la mutagenèse de transposition (clonage et construction rapides des fusions transcriptionnelles des gènes et caractérisation des gènes surexprimés)	(Pragai et al., 1994)
Plasmide (pLS20)	Favorise le transfert du plasmide pBC16 de résistance à la tétracycline de l'espèce B. subtilis (natto) aux espèces Bacillus B. anthracis, B. cereus, B. licheniformis, B. megaterium, B. pumilus, B. subtilis et B. thuringiensis.	(Koehler et Thorne, 1987)
Transposon (Tn5)	Gène de la phosphotransférase entraînant la résistance à la néomycine	(Sprengel et al., 1985)
Réplication en cercle roulant concernant la famille de plasmides pTA (pTA1015, pTA1040, pTA1050 et pTA1060)	Contient des gènes codant des peptidases de signal type I et des gènes codant des protéines appartenant à la famille aspartate phophatases régulant la réponse, qui devraient jouer un rôle dans la régulation des procédés en phase post-exponentielle.	(Meijer et al., 1998)
Plasmide (pBS4, pBS12, pBS7, pBS8, pBS6)	Non precise	(Zawadzki et al., 1996)
Transposon (catégorie d'éléments intégratifs et conjugatifs : ICEBs1)	Intégration au gène trnS-leu2 régulée par la réponse SOS et la signalisation des peptides intracellulaire du gène Rapl-Phrl Lorsque des dommages à l'ADN se produisent ou que des concentrations élevées de partenaires d'accouplement potentiels ne possèdent pas l'élément ICEBs1, celui-ci est excisé du chromosome et transféré aux receveurs.	(Auchtung et al., 2005)
Tn916 (transposon)	Joue un rôle dans le transfert horizontal des gènes de résistance aux antibiotiques chez de nombreuses espèces de bactéries Gram positif Le transfert de cet élément peut accroître la présence de la tétracycline	(Celli et Trieu-Cuot, 1998; Marra et Scott, 1999)
Tn5397 (transposon)	Provient de l'espèce Clostridium difficile; transfert de l'élément à l'espèce B. subtilis et à partir de cette dernière Code un système de conjugaison semblable à celui de Tn916 Contient un intron du groupe II	(Roberts et al., 2001; Wang et Mullany, 2000)
Tn5398 (transposon)	Provient de l'espèce C. difficile Facilite le transfert du gène de résistance aux macrolides, aux lincosamides et aux streptogramines (MLS) (ermBZ)	(Mullany et al., 1995)
IS4Bsu1 (élément mobile)	Se déplace spontanément chez le gène swrA dans l'espèce B. subtilis natto; cause un défaut dans la synthèse de l'acide poly-gamma-glutamique (gamma-PGA)	(Kimura et al., 2011)

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Annexe 6 : Gènes de virulence

Tableau A-37. Liste de certains gènes de virulence déterminés dans certains isolats du complexe *B. subtilis*
Espèce	Gène(s) de virulence	Caractéristiques connexes	Références
B. amyloliquefaciens	HblC, HblD, HblA, NheB, NheA	Production d'entérotoxine et bêta-hémolyse discontinue	(Phelps et McKillip, 2002)
B. licheniformis	cesA	Céréulide synthase	(Nieminen et al., 2007)
B. licheniformis	lchAA, lchAB, lchAC	Lichénysine synthase	(Nieminen et al., 2007)
B. licheniformis	bceT, hblC, hblA, hblD	Entérotoxine Hbl, entérotoxine hémolytique Bacillus	(Oguntoyinbo et Sanni, 2007; Rowan et al., 2001)
B. licheniformis	lchAA, lchAB et lchAC (gènes de la lichénysine synthase)	Surfactant lichénysine Toxines constituées de lipopeptides cycliques thermostables; immobilise le sperme de porc Structurellement semblable à la céréulide, mais l'activité toxique semble différente; peut former des canaux ioniques dans la membrane cellulaire de l'hôte et possède un effet surfactant	(Logan, 2012; Mikkola et al., 2000; Nieminen et al., 2007; Peypoux et al., 1999)
B. licheniformis	bacA, bacB, bacC (gènes de la bacitracine synthétase)	Polipeptides cycliques; interfèrent avec la synthèse de la paroi cellulaire et du peptidoglycane des bactéries Gram positif et Gram négatif; pourraient être liés directement ou indirectement à la résistance à l'érythromycine	(Ishihara et al., 2002)
B. licheniformis et B. subtilis	bceT, hblC, hblA, hblD	Production d'entérotoxines diarrhéogènes	(Rowan et al., 2001)

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Annexe 7 : Essais de virulence et de pathogénicité des souches de B. licheniformis/subtilis inscrites à la Liste intérieure : Activité hémolytique

Données générées par la Direction générale de la santé environnementale et de la sécurité des consommateurs de Santé Canada. Les souches ont été cultivées sur gélose à 5 % de sang de mouton et incubées à 37 °C pendant 24 heures. L'hémolyse a été évaluée d'après les zones éclaircies autour des colonies, ce qui indique la lyse des globules rouges.

Tableau A-38. Activité hémolytique des souches de *B. licheniformis/subtilis* inscrites à la *Liste intérieure*
Souche inscrite à la LIS	Activité hémolytique
B. amyloliquefaciens 13563-0	+^{Note de bas de page Annexe 7 Tableau A38[a]},^{Note de bas de page Annexe 7 Tableau A38[b]}
B. atrophaeus 18250-7	-^{Note de bas de page Annexe 7 Tableau A38[c]}
B. licheniformis ATCC 12713	+^{Note de bas de page Annexe 7 Tableau A38[d]}
B. subtilis ATCC 6051A	F^{Note de bas de page Annexe 7 Tableau A38[e]}
B. subtilis ATCC 55405	F
B. subtilis sous-espèce subtilis ATCC 6051	F
B. subtilis sous-espèce inaquosorum ATCC 55406	+
Espèce Bacillus 16970-5	F
Espèce Bacillus 2 18118-1	F
Espèce Bacillus 4 18121-4	-
Espèce Bacillus 7 18129-3	F

Note de bas de page Annexe 7 Tableau A38 a

+, activité hémolytique

Retour à la note de page Annexe 7 Tableau A38a

Note de bas de page Annexe 7 Tableau A38 b

Hémolyse observée dans 5 à 10 % des colonies

Retour à la note de page Annexe 7 Tableau A38b

Note de bas de page Annexe 7 Tableau A38 c

-, aucune activité hémolytique

Retour à la note de page Annexe 7 Tableau A38c

Note de bas de page Annexe 7 Tableau A38 d

Hémolyse observée dans 70 à 80 % des colonies

Retour à la note de page Annexe 7 Tableau A38d

Note de bas de page Annexe 7 Tableau A38 e

F, faible activité hémolytique - le dégagement des zones ne s'étend pas au-delà de la marge de la colonie

Retour à la note de page Annexe 7 Tableau A38e

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Annexe 8 : Essais de virulence et de pathogénicité des souches de B. licheniformis/subtilis inscrites à la Liste intérieure : Production de catalase

Données générées par la Direction générale de la santé environnementale et de la sécurité des consommateurs de Santé Canada. Les bactéries ont été cultivées sur la gélose TSB à 28 °C pendant 48 heures. Une goutte de peroxyde d'hydrogène a été déposée sur les colonies pour vérifier s'il était converti en eau et en hydrogène. La réaction positive de la catalase révélait la capacité de la bactérie de se protéger contre l'oxygène réactif produit par les cellules immunitaires.

Tableau A-39. Production de catalase des souches de *B. licheniformis/subtilis* inscrites à la *Liste intérieure*
Souche inscrite à la LIS	Production de catalase
B. amyloliquefaciens 13563-0	+ (positif)
B. atrophaeus 18250-7	+
B. licheniformis ATCC 12713	+
B. subtilis ATCC 6051A	+
B. subtilis ATCC 55405	+
B. subtilis sous-espèce subtilis ATCC 6051	+
B. subtilis sous-espèce inaquosorum ATCC 55406	+
Espèce Bacillus 16970-5	+
Espèce Bacillus 2 18118-1	+
Espèce Bacillus 4 18121-4	+
Espèce Bacillus 7 18129-3	+

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Annexe 9 : Composés antimicrobiens, autres métabolites et toxines produits par certains isolats du complexe B. subtilis

**Tableau A-40. Composés antimicrobiens produits dans certaines souches de B. amyloliquefaciens**
Nom de la substance	Activité	Références
Peptides de type bactériocine	Large spectre antibactérien avec une activité contre les bactéries Gram positif	(Abriouel et al., 2011; Smitha et Bhat, 2012)
BLIS^{Note de bas de page Annexe 9 Tableau A40[a]} 5940, BLIS RC-2, BLIS 5006	Activité antibactérienne et antifongique	(Abriouel et al., 2011)
Surfactine, iturine, bacillomycine, azalomycine F, acivicine, arthrobactine, acide rhodotorulique, valinomycine, sténothricine, entérochéline, nocardamine	Activité antibactérienne et antifongique, inhibition de la croissance	(Wulff et al., 2002)
Subtilisine A	Bactériocine avec activité bactéricide contre les bactéries Gram négatif Activité spermicide contre les spermatozoïdes de porcs, de bovins, de chevaux, de rats et d'humains	(Abriouel et al., 2011)

Note de bas de page Annexe 9 Tableau A40 a

BLIS : substances inhibitrices de type bactériocine

Retour à la note de page Annexe 9 Tableau A40a

Tableau A-41. Composés antimicrobiens produits par certaines souches de *B. atrophaeus*
Nom de la substance	Activité	Références
Subtilisine A	Bactériocine avec activité bactéricide contre les bactéries Gram négatif Activité spermicide contre les spermatozoïdes de porcs, de bovins, de chevaux, de rats et d'humains	(Abriouel et al., 2011)

Tableau A-42. Composés antimicrobiens produits par certaines souches de *B. licheniformis*
Nom de la substance	Activité	Références
Amoebicine (m4-A)	Activité bactéricide et bactériolytique contre Bacilus megaterium GR10	(Lebbadi et al., 1994)
Amoebicines (A12-A et A12-B)	Activité de lyse contre l'amibe Naegkriafowkri Activité antibiotique contre les levures (Saccharomyces heterogenicus et Cryptococcus neoformans) et plusieurs espèces fongiques	(Galvez et al., 1993)
Antibiotiques (bacitracine, licheniformine, proticine)	Antibiotiques sécrétés et pouvant inhiber les organismes compétiteurs incluant des bactéries Gram positif et Gram négatif, des levures et des moisissures	(Katz et Demain, 1977)
Bacillocine, BLIS P40, BLIS ZJU12, BLIS MKU3, peptide A-12 C	Activité antibactérienne et antifongique	(Abriouel et al., 2011)
Bactériocine BL8	Thermostable, large plage de pH Activité antibactérienne contre les bactéries Gram positif	(Smitha et Bhat, 2012)
Ieodoglucomides A et B	Activité cytotoxique contre les lignées cellulaires du cancer des poumons et de l'estomac Activité antimicrobienne modérée	(Tareq et al., 2012)
Lichénicidine (α, β)	Activité antibactérienne associée à la surface de la cellule	(Abriouel et al., 2011; Begley et al., 2009; Dischinger et al., 2009)
Lichénine	Bactériocine produite dans des conditions anaérobies	(Abriouel et al., 2011)
Lichénysine	Lipopeptide qui agit comme un biosurfactant anionique et comme un antimicrobien	(Li et al., 2010; Nerurkar, 2010; Nieminen et al., 2007)
Peptide de type bactériocine	Large spectre d'activités antagonistes contre les agents pathogènes fongiques et les bactéries Gram positif, mais pas la plupart des bactéries Gram négatif	(He et al., 2006)
Surfactine, iturine, acivicine, arthrobactine, acide rhodotorulique, valinomycine	Activité antibactérienne et antifongique, inhibition de la croissance	(Wulff et al., 2002)

Tableau A-43. Composés antimicrobiens produits par certaines souches de *B. subtilis*
Nom de la substance	Activité	Référence
Anti-bactériens (éricine S et A, sublancine 168, subtiline B, subtilisine A et A1, mersacidine, bétacine, MJP1, Bac 14B, LFB112)	Activité bactérienne contre des pathogènes bactériens	(Abriouel et al., 2011)
Antibiotiques (mycobacilline, subtiline, bacilysine, bacillomycine, fongistatine, bulbiformine, bacilline, subsporine, bacillocine, mycosubtiline, fongocine, iturine, néocidine, eumycine)	Antibiotiques pouvant inhiber des organismes compétiteurs incluant des bactéries Gram positif et Gram négatif, des levures et des moisissures	(Katz et Demain, 1977)
Antibiotiques (subtiline, éricine, mersacidine, sublancine 168, subtilosine, surfactine, iturine, bacillomycine, mycosubtiline, fengycine plipastatine, corneybactine, bacilysine, bacilysocine, amicoumacine, mycobacilline, TL-119, rhizocticine, difficidine, 3,3'-neotrehalos-adiamine 168)	Activité antimicrobienne, biofilm et essaimage, phéromones dans la détection du quorum et « facteur de destruction ».	(consulté dans Stein, 2005)
Subtiline	Peptide antimicrobien Influe sur la formation de pores dans la membrane cytoplasmique Produites en plus grandes quantités lorsque la nourriture manque pour éliminer les compétitrices rivales et accroître les éléments nutritifs assimilables	(Abriouel et al., 2011)
Surfactine	Lipopeptide qui agit comme un biosurfactant et un puissant antimicrobien	(Li et al., 2010)
Thermostable, substance antimicrobienne résistante à la protéase	Inhibe la croissance de nombreuses bactéries	(Sorokulova et al., 2008)

Tableau A-44. Métabolites toxiques produits par certaines souches de *B. amyloliquefaciens*
Nom de la substance	Activité	Références
Amylosine	Inhibe la mobilité du sperme de porc; cytotoxique pour les cellules pulmonaires félines	(Mikkola et al., 2007)

**Tableau A-45. Métabolites toxiques produits par certaines souches de B. licheniformis**
Nom de la substance	Activité	Références
Composante cytotoxique non émétique thermostable	Activité cytotoxique	(De Jonghe et al., 2010)
Substance cytotoxique instable à la chaleur	Activité cytotoxique	(De Jonghe et al., 2010)
Toxine protéinique de type B. cereus	Réduction de l'activité métabolique cellulaire Activité cytotoxique	(Beattie et Williams, 1999)
Toxine émétique	Provoque des vomissements en cas d'ingestion Absorption ionophorique de K+ entraînant la dissipation du potentiel transmembranaire, stimulant ainsi l'enflure et la respiration dans la mitochondrie, ce qui conduit à leur inactivation	(Biesta-Peters et al., 2010; From et al., 2005)
Entérotoxine hémolysine BL (Hbl)	Provoque la diarrhea	(Rowan et al., 2001)
Toxine de type diarrhéique de B. cereus instable à la chaleur	Cytotoxique pour les cellules McCoy, ce qui entraîne une fuite dans les membranes, rompt les surfaces cellulaires et diminue l'activité métabolique	(Lindsay et al., 2000)
Lichénysine	Inhibe la motilité des spermatozoïdes Synthétisée dans des conditions aérobies et anaérobies pendant la croissance Variations propres aux espèces (A, B, C, D, G et le surfactant BL86)	(Li et al., 2010; Nerurkar, 2010; Nieminen et al., 2007)
Lichénysine A	Entraîne une perte de mobilité, des dommages à la membrane plasmique et à l'acrosome, une perte de NADH et ATP cellulaires dans les spermatozoïdes de porcs Toxique pour les cellules mammaliennes naturelles (bénignes) Peut être produite par voie aérobie et anaérobie Plus puissante que la surfactine et la lychensine B	(Mikkola et al., 2000; Yakimov et al., 1996)
Agent toxique pour le sperme non protéique thermostable	Inhibe la mobilité du sperme et gonfle l'acrosome Endommage l'intégrité des membranes cellulaires Appauvrit la cellule ATP cellulaire Activité bêta-hémolytique	(Salkinoja-Salonen et al., 1999)
NucB	Dégrade l'ADN extracellulaire qui est essentiel aux bioflms formés par une espèce unique ou par des espèces mixtes Désoxyribonucléase non toxique Enzyme de sporulation	(Rajarajan et al., 2013; Shakir et al., 2012)
Surfactine	Inhibe les champignons phytopathogènes	(Nerurkar, 2010)

Tableau A-46. Métabolites toxiques produits par certaines souches de *B. subtilis*
Nom de la substance	Activité	Références
Composante cytotoxique non émétique thermostable et substance cytotoxique instable à la chaleur	Activité cytotoxique	(De Jonghe et al., 2010)
Entérotoxine hémolysine BL (Hbl)	Provoque la diarrhée	(Rowan et al., 2001)
Substances protéolytiques et lipolytiques	Lyse des protéines et des lipides	(De Jonghe et al., 2010)
Toxine émétique putative	Provoque des nausées et des vomissements	(From et al., 2005)

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Annexe 10 : Essais de virulence et de pathogénicité des souches de B. licheniformis/subtilis inscrites à la Liste intérieure : cytotoxicité

Données générées par la Direction générale de la santé environnementale et de la sécurité des consommateurs de Santé Canada. Le test MTT a été utilisé pour déterminer le potentiel cytotoxique des souches pour HT29 (cellules épithéliales du côlon) et J774A.1 (cellules macrophages). Le MTT est un sel de bromure soluble jaune, qui est réduit à du cristal de formazan insoluble violet par les enzymes déshydrogénases des cellules vivantes (ce qui indique une activité mitochondriale). À l'état de cristal, après la réduction, il est piégé dans la cellule. Le DMSO, ou un autre solvant tel que de l'isopropanol ou de l'huile minérale, peut être utilisé pour solubiliser le formazan, qui peut ensuite sortir de la cellule, transformant ainsi la couleur du solvant en violet qui est détectable avec un spectrophotomètre. Ce test convient aux cellules animales adhérentes. Des cellules bactériennes actives sur le plan métabolique peuvent également réduire le MTT. Puisque la plupart des cellules animales ne sont pas des bactéries adhérentes, leur contribution au formazan peut être rincée avec du PBS avant la solubilisation.

HT29 et J774A.1 ont été incubées à 37 °C en présence de 5 % de dioxyde de carbone. Des cellules mammaliennes ont reçu une dose de 10⁶ UFC de cellules végétatives pendant 2, 4 et 24 heures. Les cellules traitées ont été lavées deux fois avec du PBS avant l'ajout de MTT.

La perte constatée dans l'activité de bioréduction des lignées cellulaires envers le MTT a été mesurée en vue de déterminer le potentiel cytotoxique des souches du groupe B. licheniformis/subtilis inscrites à la Liste intérieure. La cytotoxicité est liée à une augmentation des pertes dans l'activité de bioréduction des lignées cellulaires.

Tableau A-47. Potentiel cytotoxique des souches de *B. licheniformis/subtilis* inscrites à la *Liste intérieure* envers les cellules HT29 cultivées en présence de gentamicine après 2, 4 et 24 heures
Souche inscrite à la LIS^{Note de bas de page Annexe 10 Tableau A47[a]}	2 heures	4 heures	24 heures
B. amyloliquefaciens 13563-0	F^{Note de bas de page Annexe 10 Tableau A47[b]}	F	F
B. atrophaeus 18250-7	F^{Note de bas de page Annexe 10 Tableau A47[c]}	F	F
B. licheniformis ATCC 12713	F	F	F
B. subtilis sous-espèce inaquosorum ATCC 55406	F	-	-
Espèce Bacillus 16970-5	F	-	F
Espèce Bacillus 2 18118-1	-	-	-
Espèce Bacillus 4 18121-4	F	F	F

Note de bas de page Annexe 10 Tableau A47 a

Aucune donnée disponible pour les souches ATCC 6051A de B. subtilis, ATCC 55405 de B. subtilis, ATCC 6051 de B. subtilis sous-espèce subtilis et l'espèce Bacillus 7 18129-3

Retour à la note de page Annexe 10 Tableau A47a

Note de bas de page Annexe 10 Tableau A47 b

F, faible toxicité cytotoxique (5 - 50 % de perte dans la bioréduction)

Retour à la note de page Annexe 10 Tableau A47b

Note de bas de page Annexe 10 Tableau A47 c

Liée aux composantes structurelles

Retour à la note de page Annexe 10 Tableau A47c

**Tableau A-48. Potentiel cytotoxique des souches de *B. licheniformis/subtilis* inscrites à la *Liste intérieure* envers les cellules HT29 cultivées sans gentamicine après 2, 4 et 24 heures**
Souche inscrite à la LIS	2 heures	4 heures	24 heures
B. amyloliquefaciens 13563-0	F^{Note de bas de page Annexe 10 Tableau A48[a]}	F	F
B. atrophaeus 18250-7	F^{Note de bas de page Annexe 10 Tableau A48[b]}	F	F
B. licheniformis ATCC 12713	F	F	+^{Note de bas de page Annexe 10 Tableau A48[c]},^{Note de bas de page Annexe 10 Tableau A48[d]}
B. subtilis ATCC 6051A	AD^{Note de bas de page Annexe 10 Tableau A48[e]}	F	F
B. subtilis ATCC 55405	AD	-^{Note de bas de page Annexe 10 Tableau A48[f]}	-
B. subtilis sous-espèce subtilis ATCC 6051^T	AD	F	F
B. subtilis sous-espèce inaquosorum ATCC 55406	F	F	+
Espèce Bacillus 16970-5	F	F	+
Espèce Bacillus 2 18118-1	F	F	+^[c]
Espèce Bacillus 4 18121-4	F	F	F
Espèce Bacillus 7 18129-3	AD	F	F

Note de bas de page Annexe 10 Tableau A48 a

F, faible toxicité cytotoxique (5 - 50 % de perte dans la bioréduction)

Retour à la note de page Annexe 10 Tableau A48 a

Note de bas de page Annexe 10 Tableau A48 b

Liée aux composantes structurelles

Retour à la note de page Annexe 10 Tableau A48 b

Note de bas de page Annexe 10 Tableau A48 c

+, activité cytotoxique ( supérieur(e) à 50 % de perte dans la bioréduction)

Retour à la note de page Annexe 10 Tableau A48 c

Note de bas de page Annexe 10 Tableau A48 d

Liée à la croissance

Retour à la note de page Annexe 10 Tableau A48 d

Note de bas de page Annexe 10 Tableau A48 e

AD, aucune donnée

Retour à la note de page Annexe 10 Tableau A48 e

Note de bas de page Annexe 10 Tableau A48 f

-, aucune activité cytotoxique ( inférieur(e) à 5 % de perte dans la bioréduction)

Retour à la note de page Annexe 10 Tableau A48 f

**Tableau A-49. Potentiel cytotoxique des souches de *B. licheniformis/subtilis* inscrites à la *Liste intérieure* envers les cellules J774A.1 avec gentamicine à 2, 4 et 24 heures**
Souche inscrite à la LIS^{Note de bas de page Annexe 10 Tableau A49[a]}	2 heures	4 heures	24 heures
B. amyloliquefaciens 13563-0	-^{Note de bas de page Annexe 10 Tableau A49[b]}	-	-
B. atrophaeus 18250-7	F^{Note de bas de page Annexe 10 Tableau A49[c]},^{Note de bas de page Annexe 10 Tableau A49[d]}	F	F
B. licheniformis ATCC 12713	-	-	F
B. subtilis sous-espèce inaquosorum ATCC 55406	F	F	F
Espèce Bacillus 16970-5	F	F	F
Espèce Bacillus 2 18118-1	-	-	-
Espèce Bacillus 4 18121-4	-	F	F

Note de bas de page Annexe 10 Tableau A49 a

Aucune donnée disponible pour les souches ATCC 6051A de B. subtilis, ATCC 55405 de B. subtilis, ATCC 6051^T de B. subtilis sous-espèce subtilis et l'espèce Bacillus 7 18129-3

Retour à la note de page Annexe 10 Tableau A49 a

Note de bas de page Annexe 10 Tableau A49 b

-, aucune activité cytotoxique ( inférieur(e) à 5 % de perte dans la bioréduction)

Retour à la note de page Annexe 10 Tableau A49 b

Note de bas de page Annexe 10 Tableau A49 c

F, faible toxicité cytotoxique (5 - 50 % de perte dans la bioréduction)

Retour à la note de page Annexe 10 Tableau A49 c

Note de bas de page Annexe 10 Tableau A49 d

Liée aux composantes structurelles

Retour à la note de page Annexe 10 Tableau A49 d

**Tableau A-50. Potentiel cytotoxique des souches de *B. licheniformis/subtilis* inscrites à la *Liste intérieure* envers les cellules J774A.1 sans gentamicine à 2, 4 et 24 heures**
Souche inscrite à la LIS	2 heures	4 heures	24 heures
B. amyloliquefaciens 13563-0	-^{Note de bas de page Annexe 10 Tableau A50[a]}	-	-
B. atrophaeus 18250-7	F^{Note de bas de page Annexe 10 Tableau A50[b]},^{Note de bas de page Annexe 10 Tableau A50[c]}	F	F
B. licheniformis ATCC 12713	F	-	F
B. subtilis ATCC 6051A	AD^{Note de bas de page Annexe 10 Tableau A50[d]}	F	F
B. subtilis ATCC 55405	AD	-	F
B. subtilis sous-espèce subtilis ATCC 6051^T	AD	-	F
B. subtilis sous-espèce inaquosorum ATCC 55406	-	-	+^{Note de bas de page Annexe 10 Tableau A50[e]}
Espèce Bacillus 16970-5	-	-	F
Espèce Bacillus 2 18118-1	-	-	+^{Note de bas de page Annexe 10 Tableau A50[f]}
Espèce Bacillus 4 18121-4	-	-	F
Espèce Bacillus 7 18129-3	AD	-	F

Note de bas de page Annexe 10 Tableau A50 a

-, aucune activité cytotoxique ( inférieur(e) à 5 % de perte dans la bioréduction)

Retour à la note de page Annexe 10 Tableau A50 a

Note de bas de page Annexe 10 Tableau A50 b

F, faible toxicité cytotoxique (5 - 50 % de perte dans la bioréduction)

Retour à la note de page Annexe 10 Tableau A50 b

Note de bas de page Annexe 10 Tableau A50 c

Activité cytotoxique liée aux composantes structurelles

Retour à la note de page Annexe 10 Tableau A50 c

Note de bas de page Annexe 10 Tableau A50 d

AD, aucune donnée

Retour à la note de page Annexe 10 Tableau A50 d

Note de bas de page Annexe 10 Tableau A50 e

+, activité cytotoxique ( supérieur(e) à 50 % de perte dans la bioréduction)

Retour à la note de page Annexe 10 Tableau A50 e

Note de bas de page Annexe 10 Tableau A50 f

Activité cytotoxique liée à la croissance

Retour à la note de page Annexe 10 Tableau A50 f

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Annexe 11 : Résultats des essais de pathogénicité, de toxicité et du pouvoir d'irritation des souches du complexe B. subtilis menés sur les vertébrés, les invertébrés et les plantes terrestres et aquatiques

**Tableau A-51. Résultats des essais de pathogénicité, de toxicité et du pouvoir d'irritation de la souche FZB24 de *B. amyloliquefaciens*^{Note de bas de page Annexe 11 Tableau A51[a]}**
Genre d'étude	Organisme cible	Concentration par dose	Résultat
Toxicité aiguë par voie orale et infectivité	Rats CD	1,3 × 10⁸ UFC/animal	Faible toxicité, non pathogène DL₅₀ supérieur(e) à 1,3 × 10⁸ UFC/ animal
Toxicité aiguë par voie pulmonaire et infectivité	Rats CD	0,1 mL d'au moins 1,4 × 10⁸ UFC viables par animal	Faible toxicité, non pathogène DL₅₀ supérieur(e) à 1,4 × 10⁸ UFC/ animal
Toxicité aiguë par voie pulmonaire et infectivité	Rats	1,3 × 10⁸ UFC	Non toxique/ Non pathogène
Infectivité aiguë par voie intraveineuse	Rats CD	0,5 mL d'au moins 1,0 × 10⁷ UFC/animal	Non pathogène DL₅₀ supérieur(e) à 1,0 × 10⁷ UFC/ animal
Infectivité aiguë par voie intraveineuse	Rats	1,7 × 10⁸ UFC	Non toxique/ Non pathogène
Toxicité dermale aiguë	Lapins	2 000 mg/kg p.c.^{Note de bas de page Annexe 11 Tableau A51[b]} (1,5 à 2 × 10¹² UCF/animal)	Faible toxicité, mais très irritante DL₅₀ supérieur(e) à 2 000 mg/kg
Irritant oculaire primaire	Lapins	0,5 g de substance d'essai granulaire (7,0 × 10¹⁰ UCF/g) et 0,5 mL de 1,5 % en poids par volume d'une suspension	Aucune irritation observée
Irritation oculaire de première importance	Lapin	3,6 × 10¹⁰ UCF	Irritation oculaire
Irritation cutanée aiguë	Lapin blanc néo-zélandais	2 000 mg/kg p.c. (1,5 à 2 × 10¹² UCF/animal)	Faible toxicité et extrêmement irritante DL₅₀ supérieur(e) à 2 000 mg/kg/p.c.
Toxicité aviaire par voie orale	Colin de Virginie (Colinus virginianus)	10 mL/kg p.c. ou 1,0 × 10⁹ UFC/g p.c.	DSEO^{Note de bas de page Annexe 11 Tableau A51[c]} : 1,0 × 10⁹ UFC/animal
Toxicité pour les arthropodes terrestres	Abeilles adultes (Apis mellifera)	10⁵ UFC/mL	Aucun signe de toxicité ou de pathogénicité CL₅₀ supérieur(e) à 1,0 × 10⁶ UFC/mL
Toxicité pour les arthropodes terrestres	Larve (Apis meelifera)	6,0 × 10³ UFC/larve	CL₅₀ supérieur(e) à 6,0 × 10³ UFC/larve
Invertébrés autres que les arthropodes terrestres	Ver (Eisenia fetida)	6,0 × 10¹¹ UFC/kg sol	CSEO^{Note de bas de page Annexe 11 Tableau A51[d]} : 6,0 × 10¹¹ UFC/kg sol
Toxicité/pathogénicité pour le poisson d'eau douce	Truite arc-en-ciel (Oncorhynchus mykiss)	de 1,85 × 10⁹ UFC/kg à 1,85 × 10¹⁰ UFC/L (ingrédient actif)	CL₅₀ supérieur(e) à 1,85 × 10¹⁰ UFC/L CSEO : 1,85 × 10¹⁰ UFC/L
Toxicité/pathogénicité pour l'invertébré d'eau douce	Daphnia magna	Jusqu'à 1,85 × 10¹⁰ UFC/L	CL₅₀ supérieur(e) à 1,85 × 10¹⁰ UFC/L CSEO : 1,85 × 10¹⁰ UFC/L

Note de bas de page Annexe 11 Tableau A51 a

Études effectuées avec la matière active de qualité technique et non la préparation commerciale contenant le micro-organisme (Agence de réglementation de la lutte antiparasitaire de Santé Canada, 2012; USEPA, 2012)

Retour à la note de page Annexe 11 Tableau A51 a

Note de bas de page Annexe 11 Tableau A51 b

p.c., poids corporel

Retour à la note de page Annexe 11 Tableau A51 b

Note de bas de page Annexe 11 Tableau A51 c

DSEO, dose sans effet observé : dose la plus élevée de la substance d'essai dans le substrat d'essai à laquelle aucun effet statistiquement significatif sur l'organisme d'essai n'a été observé par rapport au groupe témoin

Retour à la note de page Annexe 11 Tableau A51 c

Note de bas de page Annexe 11 Tableau A51 d

CSEO, concentration sans effet observé : concentration la plus élevée de la substance d'essai dans le substrat d'essai à laquelle aucun effet statistiquement significatif sur l'organisme d'essai n'a été observé par rapport au groupe témoin

Retour à la note de page Annexe 11 Tableau A51 d

**Tableau A-52. Résultats des essais de pathogénicité, de toxicité et du pouvoir d'irritation de la souche D747 de *B. amyloliquefaciens*^{Note de bas de page Annexe 11 Tableau A52[a]}**
Genre d'étude	Organisme cible	Concentration par dose	Résultat
Toxicité aiguë par voie orale	Rats Sprague-Dawley (5 semaines, mâles et femelles)	10⁸ UFC/animal	Non toxique, infectant ou pathogène DL₅₀ supérieur(e) à 5 000 mg/kg
Toxicité pulmonaire aiguë	Rats Sprague-Dawley (5 semaines, mâles et femelles)	10⁷ UFC/animal	Non toxique ou pathogène CL₅₀ supérieur(e) à 2,18 mg/L
Injection aiguë	Rats Sprague-Dawley (5 semaines, mâles et femelles)	10⁷ UFC/animal	Non toxique, infectant ou pathogène DL₅₀ supérieur(e) à 5 050 mg/kg
Irritation oculaire aiguë	Lapins blancs néo-zélandais	0,1 mL de la préparation commerciale	Irritation oculaire
Irritant cutané primaire	Lapins blancs néo-zélandais	500 mg de la préparation commerciale	Aucune preuve d'irritation
Toxicité aviaire par voie orale	Colin de Virginie [caille] (Colinus virginianus)	8,9 × 10⁹ spores/ oiseau	Non toxique DL₅₀ supérieur(e) à 4,5 × 10¹¹spores/kg p.c. ou supérieur(e) à 8,0 × 10¹⁰spores/ oiseau
Toxicité/pathogénicité pour le poisson d'eau douce	Truite arc-en-ciel (Oncorhynchus mykiss)	1,7 × 10⁸ UFC/L	CL₅₀ : 8,1 × 10¹⁰ UFC/L CSEO : 1,44 × 10¹⁰ UFC/L
Toxicité/pathogénicité pour l'invertébré d'eau douce	Daphnia magna	1,7 × 10⁸ UFC/L	CE₅₀ : 3,7 × 10¹⁰ UFC/L CSEO : 2,84 × 10⁸ UFC/L

Note de bas de page Annexe 11 Tableau A52 a

Études effectuées avec la matière active de qualité technique et non la préparation commerciale contenant le micro-organisme (USEPA, 2011)

Retour à la note de page Annexe 11 Tableau A52 a

**Tableau A-53. Résultats des essais de pathogénicité, de toxicité et du pouvoir d'irritation de la souche SB3086 de *B. licheniformis*^{Note de bas de page Annexe 11 Tableau A53[a]}**
Genre d'étude	Organisme cible	Concentration par dose	Résultat
Toxicité/pathogénicité aiguë par voie orale	Rats	1,0 × 10⁸ UFC/animal^{Note de bas de page Annexe 11 Tableau A53[b]}	Non toxique, infectant ou pathogène DL₅₀ supérieur(e) à 5 000 mg/kg
Toxicité/pathogénicité pulmonaire aiguë	Rats	1,1 × 10⁸ UFC/animal^[b]	Non toxique, infectant ou pathogène
Toxicité/pathogénicité aiguë par intraveineuse	Rats	1,0 × 10⁷ UFC/animal^[b]	Non toxique, infectant ou pathogène
Toxicité dermale aiguë	Lapins blancs néo-zélandais	AD^{Note de bas de page Annexe 11 Tableau A53[c]},^{Note de bas de page Annexe 11 Tableau A53[d]}	DL₅₀ supérieur(e) à 5 050 mg/kg
Irritant oculaire primaire	Lapins blancs néo-zélandais	0,1 mL/animal (concentration non fournie)^[d]	Non irritant
Hypersensibilité au contact retardée	Cobaye	AD^[d]	N'est pas un sensibilisant cutané
Toxicité/pathogénicité aviaire par voie orale	Jeunes Canards colverts (Anas platyrhynchos)	4,5 × 10¹⁰ UFC/kg de p.c.	Aucun signe de maladie ou comportement anormal observé
Toxicité/pathogénicité pour le poisson d'eau douce	Truite arc-en-ciel (Oncorhynchus mykiss)	CL₅₀ (de formule 710-132) supérieur(e) à 1,1 × 10⁶ UFC/mL^[b]	Aucun effet observé résultant de l'agent microbien actif
Toxicité/pathogénicité pour les invertébrés aquatiques d'eau douce (cycle de renouvellement de 21	Daphnia magna	1 × 10⁴ UFC/mL^[b]	CL₅₀ : 1,8 × 10⁶ UFC/mL CSENOd :1,2 × 10⁶/UFC/mL^[b],^{Note de bas de page Annexe 11 Tableau A53[e]} 2 daphnies sont mortes à la fin de l'essai à 1 × 10⁷ UFC/mL (1 000 fois la concentration environnementale escomptée)
Toxicité/pathogénicité pour les invertébrés	Larve d'abeille domestique (Apis mellifera L.)	1,6 × 10⁶ UFC/mL (de formule 710-132)^{Note de bas de page Annexe 11 Tableau A53[f]}	Aucun effet statistiquement significatif observé sur la survie des larves, ni aucun comportement défavorable ou anomalie de développement

Note de bas de page Annexe 11 Tableau A53 a

(USEPA, 2001)

Retour à la note de page Annexe 11 Tableau A53 a

Note de bas de page Annexe 11 Tableau A53 b

MAQT, matière active de qualité technique

Retour à la note de page Annexe 11 Tableau A53 b

Note de bas de page Annexe 11 Tableau A53 c

AD, aucune donnée

Retour à la note de page Annexe 11 Tableau A53 c

Note de bas de page Annexe 11 Tableau A53 d

CSENO, concentration sans effet nocif observé

Retour à la note de page Annexe 11 Tableau A53 d

Note de bas de page Annexe 11 Tableau A53 e

Les ingrédients de la préparation sont des substances toxiques aquatiques connues à des concentrations élevées

Retour à la note de page Annexe 11 Tableau A53 e

Note de bas de page Annexe 11 Tableau A53 f

PC, préparation commerciale

Retour à la note de page Annexe 11 Tableau A53 f

Tableau A-54. Résultats des essais de pathogénicité, de toxicité et d'irritation pour plusieurs souches de *B. licheniformis* et *B. subtilis*
Genre d'étude	Organisme cible	Concentration par dose	Résultat
Infection expérimentale (inoculation par voie intraveineuse)^{Note de bas de page Annexe 11 Tableau A54[a]}	Système immunitaire affaibli des souris BALB/c	4 × 10⁷ UFC	Nombreuses lésions plus importantes observées dans de nombreux organes et plus d'infections graves découlant des lésions se produisant dans plus d'organes par rapport aux souris normales et en bonne santé utilisées dans l'étude
Infection expérimentale (inoculation par voie intraveineuse)^[a]	Souris normales	4 × 10⁷ UFC	Lésions observées dans le foie et les reins
Infection expérimentale (inoculation par voie intraveineuse)^{Note de bas de page Annexe 11 Tableau A54[b]}	Système immunitaire affaibli des souris BALB/c	Doses de inférieur(e) à 10⁶ à 10¹⁰ UFC par voie intraveineuse	Seules les lésions cérébrales et pulmonaires pourraient être attribuées à la souche B. licheniformis. Les souris étaient capables d'éliminer de grandes quantités de bactéries dans un délai d'une semaine.
Infection expérimentale (inoculation par voie intraveineuse)^{Note de bas de page Annexe 11 Tableau A54[c]}	Vaches gravides de descendance croisée entre les vaches laitières danoises rouges et les vaches américaines « Brown Swiss » (6 à 8 mois de gestation, n = 8) et leurs veaux	Doses de inférieur(e) à 10⁹ à 10¹² UFC par voie intraveineuse (une seule fois ou sur 4 jours consécutifs)	Démonstration du potentiel de l'agent abortif de la souche B. licheniformis et du tropisme placentaire des bovins. Lésions dans les membranes fœtales, la partie fœtale des placentomes, nécrose dans le compartiment fœtal du placenta et inflammation chez certains veaux. Deux avortements ont été observés.
Activité cytotoxique^{Note de bas de page Annexe 11 Tableau A54[d]}	Inhibition de la motilité du sperme de sanglier	1-10 μg/mL	CE₅₀ : 20-30 μg/mL
Étude sur l'irritation oculaire aiguë^{Note de bas de page Annexe 11 Tableau A54[e]}	Lapins albinos mâles	0,1 g de 1,1 × 10¹¹ UFC/kg p.c.	Aucune irritation ou aucun symptôme négatif observé dans la cornée ou l'iris
Étude sur l'irritation cutanée aiguë^[e]	Lapins albinos mâles	0,5 g de 1,1 × 10¹³ UFC/kg p.c.	Aucun signe clinique d'érythème ou d'œdème
Toxicité aiguë par voie orale (14 jours)^[e]	Rats Wistar mâles albinos adultes	1,1 × 10¹¹ UFC/kg p.c.	Aucun changement lié au traitement.
Toxicité subchronique par voie orale (13 semaines)^[e]	Rats Wistar mâles et femelles	1,1 × 10¹¹ UFC/kg p.c. et 1,1 × 10¹¹ UFC/kg p.c.	DSENO^{Note de bas de page Annexe 11 Tableau A54[f]} supérieur(e) à 1,1 × 10¹¹ UFC/kg p.c.
Test du micronoyau (2 jours à 24 heures d'intervalle) ^[e]	Les souris albinos Swiss adultes mâles et femelles (souche CFT)	1,1 × 10¹⁰ UFC/kg p.c. et 1,1 × 10¹¹ UFC/kg p.c.	Aucun signe de toxicité pour la moelle osseuse et aucune génocytotoxicité observée
Étude sur la pathogénicité et la toxicité orale^{Note de bas de page Annexe 11 Tableau A54[g]}	Colin de Virginie [caille] (Colinus virginianus)	3 333 kg/mg tous les jours pendant cinq jours	DL₅₀ supérieur(e) à 2 000 mg/kg

Note de bas de page Annexe 11 Tableau A54 a

B. licheniformis ATCC 14580 (Agerholm et al., 1995)

Retour à la note de page Annexe 11 Tableau A54 a

Note de bas de page Annexe 11 Tableau A54 b

13 souches de B. licheniformis (Agerholm et al., 1997)

Retour à la note de page Annexe 11 Tableau A54 b

Note de bas de page Annexe 11 Tableau A54 c

Souche DVL 9315323 de B. licheniformis (Agerholm et al., 1999)

Retour à la note de page Annexe 11 Tableau A54 c

Note de bas de page Annexe 11 Tableau A54 d

Souches NR 5160 et NR 6768 de B. licheniformis (substance non protéinique toxique thermostable) [Nieminen et al., 2007]

Retour à la note de page Annexe 11 Tableau A54 d

Note de bas de page Annexe 11 Tableau A54 e

Souche Me I de B. licheniformis. La concentration utilisée dans l'étude correspond à 77 × 10¹¹ UFC pour un être humain pesant en moyenne 70 kg; par conséquent, on peut considérer que la concentration utilisée est de 2 566 à 77 000 fois plus sécuritaire pour la consommation humaine (plage de doses humaines : de 1 × 10⁸ à 3 × 10⁹ UFC) [Nithya et al., 2012]

Retour à la note de page Annexe 11 Tableau A54 e

Note de bas de page Annexe 11 Tableau A54 f

DSENO, dose sans effet nocif observé

Retour à la note de page Annexe 11 Tableau A54 f

Note de bas de page Annexe 11 Tableau A54 g

Souche GB03 de B. subtilis (USEPA, 1993)

Retour à la note de page Annexe 11 Tableau A54 g

Tableau A-55. Résultats des essais de pathogénicité, de toxicité et du pouvoir d'irritation d'un mélange contenant deux souches de *B. licheniformis* et *B. subtilis*^{Note de bas de page Annexe 11 Tableau A55[a]}
Genre d'étude	Organisme cible	Concentration par dose	Résultat
Toxicité aiguë	Souris BALB/c	de 5 × 10⁷ à 2 × 10¹¹ UFC/souris (administration orale)	Aucun changement dans les tissus, les organes ou le poids
Toxicité aiguë	Souris BALB/c	de 5 × 10⁷ à 5 × 10⁹ UFC/souris (administration par voie IP^{Note de bas de page Annexe 11 Tableau A55[b]} ou IV^{Note de bas de page Annexe 11 Tableau A55[c]})	Aucun changement dans les tissus, les organes ou le poids
Toxicité chronique	Souris	1 × 10⁶ UFC par jour	Aucun effet sur l'état de santé
Toxicité chronique	Lapins	1 × 10⁹ UFC par jour	Aucun effet sur l'état de santé
Toxicité chronique	Porcelets	1 × 10⁹ UFC par jour	Aucun effet sur l'état de santé

Note de bas de page Annexe 11 Tableau A55 a

Souche VKPM B2336 de B. licheniformis et souche VKPM B2335 de B. subtilis (Sorokulova et al., 2008)

Retour à la note de page Annexe 11 Tableau A55 a

Note de bas de page Annexe 11 Tableau A55 b

IP, voie intrapéritonéale

Retour à la note de page Annexe 11 Tableau A55 b

Note de bas de page Annexe 11 Tableau A55 c

IV, voie intraveineuse

Retour à la note de page Annexe 11 Tableau A55 c

**Tableau A-56. Résultats des essais de pathogénicité, de toxicité du pouvoir d'irritation de la souche QST 713 de *B. subtilis*^{Note de bas de page Annexe 11 Tableau A56[a]}**
Genre d'étude	Organisme cible	Concentration par dose	Résultat
Toxicité aiguë par voie orale et infectivité	Rats CD	1,13 × 10⁸ UFC/animal	Non toxique et non infectant DL₅₀ supérieur(e) à 1,13 × 10⁸ UFC/animal
Toxicité aiguë par voie pulmonaire et infectivité	Rats CD	1,2 × 10⁸ UFC/animal	Non toxique et non infectant DL₅₀ supérieur(e) à 1,2 × 10⁸ UFC/animal
Infectivité par voie intraveineuse	Rats CD	9,4 × 10⁸ UFC/animal	Non infectante
Toxicité dermale aiguë	Rats CD	de 2 g/kg p.c. (2,3 × 10¹¹ à 2,73 × 10¹¹ UFC/animal	Faible toxicité DL₅₀ supérieur(e) à 2g/kg p.c.
Irritation oculaire	Lapins	0,1 mL (4,8 × 10⁹ UFC/animal)	Irritation minimale
Irritation cutanée	Lapins	500 mg (2,4 × 10¹⁰ UFC/animal)	Légèrement irritant
Toxicité aviaire par voie orale	Colin de Virginie [caille] (Colinus virginianus)	1 × 10⁸ UFC/g p.c. par jour (5 000 mg/kg p.c. par jour)	DL₅₀ supérieur(e) à 5 000 mg/kg/p.c.
Poissons d'eau douce	Truite arc-en-ciel (Oncorhynchus mykiss)	Dose maximale : 1,4 × 10⁷ UFC/mL	CL₅₀ : 1,4 × 10⁷ UFC/mL
Invertébrés aquatiques d'eau douce (48 heures)	Daphnia magna	5 × 10⁵ UFC/mL, 1 × 10⁶ UFC/mL, 2 × 10⁶ UFC/mL et 4 × 10⁶ UFC/mL	Mortalité de 15, 15, 45 et 85 % respectivement, et léthargie des daphnies toujours en vie dans une solution de traitement de 100 mg/L
Invertébrés aquatiques d'eau douce (21 jours)	Daphnia magna	5 × 10⁵ UFC/mL, 1 × 10⁶ UFC/mL, 2 × 10⁶ UFC/mL et 4 × 10⁶ UFC/mL	CL₅₀ ~ 3 × 10⁵ UFC/mL CSEO : 7,5 × 10³ UFC/mL
Invertébrés aquatiques d'eau douce (21 jours)	Daphnia magna	7,9 × 10⁵ UFC/mL, 1,8 × 10⁶ UFC/mL, 3,4 × 10⁶ UFC/mL, 7,3 × 10⁶ UFC/mL et 2,0 × 10⁷ UFC/mL	CL₅₀ ~ 1,6 × 10⁶UFC/mL CSEO : 7,9 × 10⁵ UFC/mL.
Invertébrés aquatiques d'eau douce	Bouquet Mississippi (Palaemonetes pugio)	4,0 × 10⁶ UFC/g	CL₅₀ supérieur(e) à 4,0 × 10⁶ UFC/mL
Plante aqueuse	Algue verte unicellulaire (Scenedesmus subspicatus)	Dose maximale : 5,1 × 10⁵ UFC/mL	CSEO supérieur(e) à 100 mg/L CMEO supérieur(e) à 100 mg/L
Étude sur les insectes non ciblés (orale/alimentaire)	Abeille domestique - Apil mellifera L.	Dose maximale : 100 000 ppm	DL₅₀ supérieur(e) à 100 000 ppm
Toxicité/pathogénicité alimentaire	Abeille domestique - Apil mellifera L.	600, 6 000 et 60 000 ppm	CL₅₀ : 5 663 ppm
Étude sur les insectes non ciblés (orale/alimentaire)	Chrysope verte (Chrisoperla carnea)	Dose maximale : 60 000 ppm	CL₅₀ supérieur(e) à 60 000 ppm
Étude sur les insectes non ciblés (orale/alimentaire)	Coccinelle - Hippodamia convergens	Dose maximale : 1,2 × 10⁹ UFC/mL (60 000 ppm)	CL₅₀ supérieur(e) à 60 000 ppm CSEO : 60 000 ppm (1,2 × 10⁹ UFC/g)
Essai de toxicité et de pathogénicité (30 jours)	Hymenoptera parasite - Nasonia vitripenis	600, 6 000 et 60 000 ppm	CL₅₀ : 28 000 ppm (15 jours)
Étude sur les insectes non ciblés (orale/alimentaire)	Hymenoptera parasite - Nasonia vitripenis	Dose maximale : 3,2 × 10⁹ UFC/mL (60 000 ppm)	CL₅₀ ~ 24 739 ppm

Note de bas de page Annexe 11 Tableau A56 a

Études réalisées avec la matière active de qualité technique (Mendelsohn et Vaituzis, 1999; USEPA, 2006; USEPA, 2010; Agence de réglementation de la lutte antiparasitaire de Santé Canada, 2007b).

Retour à la note de page Annexe 11 Tableau A56 a

**Tableau A-57. Résultats des essais de pathogénicité, de toxicité et du pouvoir d'irritation de la souche MBI 600 de *B. subtilis*^{Note de bas de page Annexe 11 Tableau A57[a]}**
Genre d'étude	Organisme cible	Concentration par dose	Résultat
Toxicité aiguë par voie orale et infectivité	Rats CD	2,0 × 10⁸ spores	Faible toxicité, non infectant DL₅₀ supérieur(e) à 2 × 10⁸ UFC
Toxicité aiguë par voie pulmonaire et infectivité	Rats CD	de 3,3 × 10⁸ à 3,7 × 10⁸ spores	Toxique, non infectant DL₅₀ supérieur(e) à 3,5 × 10⁸UFC
Infectivité par voie intraveineuse	Rats CD	10⁷ spores	Aucun signe important de toxicité
Toxicité dermale aiguë	Lapins blancs néo-zélandais	2 mL/kg poids corporel	Faible toxicité (léger œdème) DL₅₀ supérieur(e) à 2 mL/kg poids corporel
Irritation oculaire	Lapins blancs néo-zélandais	1,0 × 10⁹ UFC	Irritation minimale
Irritation cutanée	Lapins blancs néo-zélandais	2,0 × 10¹⁰ UCF	Irritation minimale
Toxicité/pathogénicité aiguë aviaire par voie orale	Colin de Virginie [caille] (Colinus virginianus)	Concentré GUS 378 : 4 000 mg/kg p.c. par jour	Faible toxicité, non pathogène
Toxicité/pathogénicité aiguë aviaire par voie orale	Colin de Virginie [caille] (Colinus virginianus)	Métabolites hydrosolubles : 240 mg/kg p.c. par jour	Faible toxicité, non pathogène
Toxicité/pathogénicité aiguë aviaire par voie orale	Colin de Virginie [caille] (Colinus virginianus)	Spores lavées : 3 680 mg/kg p.c. par jour	Faible toxicité, non pathogène
Toxicité et pathogénicité des plantes	Graines de soja	de 10⁵ à 10⁷ spores/graines viables	Non pathogène
Toxicité et infectivité des poissons d'eau douce	Carpe	2,0 × 10⁶ UFC/mL, 2,0 × 10⁷ UFC/mL, 2,0 × 10⁸ UFC/mL	Aucune toxicité ou pathogénicité liée au traitement

Note de bas de page Annexe 11 Tableau A57 a

Retour à la note de page Annexe 11 Tableau A57 a

**Tableau A-58. Résultats des essais de pathogénicité et de toxicité des souches ATCC 6051A et ATCC 55405 de *B. subtilis*^{Note de bas de page Annexe 11 Tableau A58[a]}**
Genre d'étude	Organisme cible	Concentration par dose	Résultat
Essais de pathogénicité/toxicité	Fétuque rouge(Festuca rubra)	10⁵ UFC/g de sol (poids sec)	Longueur des pousses fortement touchée (p = 0,03) ^{Note de bas de page Annexe 11 Tableau A58[b]}
Essais de pathogénicité/toxicité	Collembole(Folsomia candida)	10³ UFC^{Note de bas de page Annexe 11 Tableau A58[c]}/g de sol (poids sec); 10⁴ UFC^{Note de bas de page Annexe 11 Tableau A58[d]}/g de sol (poids sec)	Réduction importante (p inférieur(e) à 0,01) dans la production de juvénilesc Aucune production de juvénile (il n'a pas été possible d'effectuer d'analyse statistique)d La survie des adultes n'a pas été touchée par l'une ou l'autre des souches
Essais de pathogénicité/toxicité	Ver de terre(Eisenia andrei)	10⁵ UFC^[c]/g de sol (poids sec); 10⁴ UFC^[d]/g de sol (poids sec)	Aucun effet nocif n'a été déclaré

Note de bas de page Annexe 11 Tableau A58 a

Données produites par la Division des méthodes biologiques d'Environnement Canada

Retour à la note de page Annexe 11 Tableau A58 a

Note de bas de page Annexe 11 Tableau A58 b

La survie, la croissance et la reproduction des organismes d'essai ont été fortement inhibées dans l'échantillon de sol recueilli sur le terrain par rapport au sol artificiel

Retour à la note de page Annexe 11 Tableau A58 b

Note de bas de page Annexe 11 Tableau A58 c

B. subtilis ATCC 55405

Retour à la note de page Annexe 11 Tableau A58 c

Note de bas de page Annexe 11 Tableau A58 d

B. subtilis ATCC 6051A

Retour à la note de page Annexe 11 Tableau A58 d

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Annexe 12 : Essai de virulence et de pathogénicité des souches de B. licheniformis/subtilis inscrites à la LIS

Données sur l'exposition de la souris générées par la Direction générale de la santé environnementale et de la sécurité des consommateurs de Santé Canada. Les souris BALB/c femelles ont été exposées à 10⁶ UFC/25 μL de bactéries (cellules végétatives ou spores) par nébulisation endotrachéale pour l'exposition par voie pulmonaire. Les animaux ont été autopsiés après 24 heures et après une semaine pour l'exposition aux cellules végétatives et aux spores, respectivement.

Clairance suivant l'exposition endotrachéale

**Tableau A-59. Dénombrement des cellules végétatives (UFC/mg) des souches du groupe *B. licheniformis/subtilis* inscrites à la *Liste intérieure* après une exposition endotrachéale**
Souche^{Note de bas de page Annexe 12 Tableau A59[a]}	Poumon	Trachée	Œsophage
B. amyloliquefaciens 13563-0	468,5	124,1	16,1
B. atrophaeus 18250-7	270,7	96,6	45,0
B. licheniformis ATCC 12713	323,1	31,4	14,6
B. subtilis sous-espèce inaquosorum ATCC 55406	228,4	1,5	4,8
Espèce Bacillus 16970-5	249,2	17,6	30,2
Espèce Bacillus 2 18118-1	235,0	51,8	17,8
Espèce Bacillus 4 18121-4	310,7	47,3	44,3

Note de bas de page Annexe 12 Tableau A59 a

Aucune donnée disponible pour les souches ATCC 6051A de B. subtilis, ATCC 55405 de B. subtilis, ATCC 6051 de B. subtilis sous-espèce subtilis et l'espèce Bacillus 7 18129-3

Retour à la note de page Annexe 12 Tableau A59 a

Figure A-1. Dénombrement des cellules végétatives (UFC/mg) des souches du groupe B. licheniformis/subtilis inscrites à la Liste intérieure après une exposition endotrachéale

Figure A-1 (Voir la longue description plus bas)

Description longue de la figure A-1

Figure A-1. Dénombrement des cellules végétatives (UFC/mg) des souches du groupe B. licheniformis/subtilis inscrites à la Liste intérieure après une exposition endotrachéale

Le graphique à barres montre les renseignements contenus dans le tableau A-48.

**Tableau A-60. Dénombrement des spores (UFC/mg) des souches du groupe *B. licheniformis/subtilis* inscrites à la *Liste intérieure*après une exposition endotrachéale**
Souche^{Note de bas de page Annexe 12 Tableau A60[a]}	Poumon	Trachée	Œsophage
B. amyloliquefaciens 13563-0	132,2	29,5	20,7
B. atrophaeus 18250-7	54,7	7,0	2,6
B. licheniformis ATCC 12713	6,9	1,3	1,6
B. subtilis ATCC 6051A	0,0	0,0	0,0
B. subtilis ATCC 55405	52,1	85,1	20
B. subtilis sous-espèce subtilis ATCC 6051	7,0	0,0	0,0
B. subtilis sous-espèce inaquosorum ATCC 55406	10,6	1,4	0,3
Espèce Bacillus 2 18118-1	54,8	8,5	0,4
Espèce Bacillus 4 18121-4	28,4	15,0	4,1
Espèce Bacillus 7 18129-3	7,0	0,0	0,0

Note de bas de page Annexe 12 Tableau A60 a

Aucune donnée disponible pour l'espèce Bacillus 16970-5

Retour à la note de page Annexe 12 Tableau A60 a

Figure A-2. Dénombrement des spores (UFC/mg) des souches du groupe B. licheniformis/subtilis inscrites à la Liste intérieure après une exposition endotrachéale

Figure A-2 (Voir la longue description plus bas)

Description longue de la figure A-2

Figure A-2. Dénombrement des spores (UFC/mg) des souches du groupe B. licheniformis/subtilis inscrites à la Liste intérieure après une exposition endotrachéale

Le graphique à barres montre les renseignements contenus dans le tableau A-60.

Cytokines pulmonaires

**Tableau A-61. Expression des cytokines pulmonaires (pg/mL) après l'exposition à des cellules végétatives**
Souche inscrite à la LIS^{Note de bas de page Annexe 12 Tableau A61[a]}	IL-1 bêta	IL-6	MCP-1	IL-12 (p70)	KC	TNF-alpha
Témoin (solution saline)	73,58 ± 13,26	2,02 ± 0,61	1 501,94 ± 288,19	18,07 ± 2,26	7,32 ± 1,16	728,57 ± 107,77
B. amyloliquefaciens 13563-0	141,39 ± 60,31	1,46 ± 1,11	1 597,70 ± 177,87	13,05 ± 5,77	62,46 ± 16,28	575,77 ± 58,43
Bacillus atrophaeus 18250-7	1 619,34 ± 564,47	4,20 ± 0,73	4 446,72 ± 1 536,15	16,49 ± 9,96	452,83 ± 160,76	718,82 ± 135,08
B. licheniformis ATCC 12713	1 818,28 ± 573,73	5,80 ± 1,94	6 032,81 ± 2 094,65	19,08 ± 7,44	387,79 ± 146,88	705,84 ± 228,92
B. subtilis sous-espèce inaquosorum ATCC 55406	262,22 ± 44,63	1,10 ± 0,49	1 624,45 ± 242,78	12,23 ± 4,65	34,61 ± 19,19	591,58 ± 87,85
Espèce Bacillus 16970-5	101,13 ± 5,94	1,10 ± 0,53	1 651,50 ± 319,11	16,38 ± 5,78	26,29 ± 18,31	667,01 ± 133,49
Espèce Bacillus 2 18118-1	1 444,876 ± 778,68	4,53 ± 2,24	5 554,10 ± 2 162,64	13,95 ± 2,00	660,90 ± 74,56	647,20 ± 205,74
Espèce Bacillus 4 18121-4	7 545,602 ± 1 988,01	53,43 ± 21,70	20 278,06 ± 7 401,54	24,40 ± 7,21	2 082,50 ± 501,70	983,90 ± 172,32

Note de bas de page Annexe 12 Tableau A61 a

Aucune donnée disponible pour les souches ATCC 6051A de B. subtilis, ATCC 55405 de B. subtilis, ATCC 6051de B. subtilis sous-espèce subtilis et l'espèce Bacillus 7 18129-3

Retour à la note de page Annexe 12 Tableau A61 a

**Tableau A-62. Expression des cytokines pulmonaires (pg/mL) après l'exposition à des spores**
Souche inscrite à la LIS^{Note de bas de page Annexe 12 Tableau A62[a]}	IL-bêta	IL-6	MCP-1	IL-12 (p70)	KC	TNF-alpha
Témoin (solution saline)	90,86 ± 13,65	2,29 ± 1,27	837,12 ± 147,20	12,62 ± 8,05	9,13 ± 2,46	484,79 ± 160,58
B. amyloliquefaciens 13563-0	98,07 ± 11,21	2,87 ± 1,75	921,78 ± 187,96	9,82 ± 7,62	11,89 ± 4,39	476,05 ± 167,15
Bacillus atrophaeus 18250-7	120,36 ± 52,91	2,53 ± 1,60	750,55 ± 146,43	14,23 ± 8,82	9,48 ± 2,70	521,90 ± 110,22
Espèce Bacillus 2 18118-1	104,37 ± 9,54	2,13 ± 1,78	843,20 ± 101,71	13,86 ± 6,73	10,0 ± 3,74	526,06 ± 115,86
Espèce Bacillus 4 18121-4	90,31 ± 19,54	3,06 ± 1,47	884,30 ± 105,05	17,10 ± 6,72	7,17 ± 0,74	374,76 ± 91,07

Note de bas de page Annexe 12 Tableau A62 a

Aucune donnée disponible sur les souches ATCC 12713 de B. licheniformis, ATCC 6051A de B. subtilis, ATCC 55405 de B. subtilis, ATCC 55406 de B. subtilis sous-espèce inaquosorum, l'espèce Bacillus 16970-5 et l'espèce Bacillus 7 18129-3

Retour à la note de page Annexe 12 Tableau A62 a

Réponse en phase aiguë

Tableau A-63. Concentration d'amyloïde A^{Note de bas de page Annexe 12 Tableau A63[a]} (µg/mL) dans les échantillons de sérum obtenus de souris BALC/c traitées avec des cellules végétatives ou des spores des souches inscrites à la *Liste intérieure*
Souche^{Note de bas de page Annexe 12 Tableau A63[b]}	Cellules végétatives	Spores
Témoin (solution saline)	13,80 ± 3,52	14,08 ± 0,63
B. amyloliquefaciens 13563-0	17,87 ± 2,73	16,60 ± 2,09
Bacillus atrophaeus 18250-7	20,73 ± 1,21	21,56 ± 14,0
B. licheniformis ATCC 12713	39,54 ± 28,54	Aucune donnée
B. subtilis sous-espèce inaquosorum ATCC 55406	17,76 ± 4,34	Aucune donnée
Espèce Bacillus 16970-5	13,72 ± 2,66	13,88 ± 3,10
Espèce Bacillus 2 18118-1	23,35 ± 3,29	16,04 ± 2,38
Espèce Bacillus 4 18121-4	17,68 ± 7,89	Aucune donnée

Note de bas de page Annexe 12 Tableau A63 a

L’amyloïde A sérique, qui est un indicateur des effets systémiques, a été mesurée par analyse immuno-enzymatique

Retour à la note de page Annexe 12 Tableau A63 a

Note de bas de page Annexe A Tableau A63 b

bAucune donnée disponible pour les souches ATCC 6051A de B. subtilis, ATCC 55405 de B. subtilis, ATCC 6051 de B. subtilis sous-espèce subtilis et l'espèce Bacillus 7 18129-3

Retour à la note de page Annexe 12 Tableau A63 b

Figure A-3. Concentration d'amyloïde A (µg/mL) dans les échantillons de sérum obtenus de souris BALC/c traitées avec des cellules végétatives ou des spores des souches inscrites à la Liste intérieure

Figure A-3 (Voir la longue description plus bas)

Description longue de la figure A-3

Figure A-3. Concentration d’amyloïde A (µg/mL) dans les échantillons de sérum obtenus de souris BALC/c traitées avec des cellules végétatives ou des spores des souches inscrites à la Liste intérieure

Le graphique à barres montre les renseignements contenus dans le tableau A-52.

Figure A-4. Concentration d'amyloïde A (µg/mL) dans les échantillons de sérum obtenus de souris BALC/c traitées avec des spores des souches inscrites à la LIS

Figure A-4 (Voir la longue description plus bas)

Description longue de la figure A-4

Figure A-4. Concentration d'amyloïde A (µg/mL) dans les échantillons de sérum obtenus de souris BALC/c traitées avec des spores des souches inscrites à la LIS

Le graphique à barres montre les renseignements sur les spores contenus dans le tableau A-52.

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Annexe 13 : Éclosions d'intoxications alimentaires

Tableau A-64. Éclosions d'intoxications impliquant *B. licheniformis*
Lieu	Année	Nombre de cas^{Note de bas de page Annexe 13 Tableau A64[a]}	Symptômes	Cause	Mort
Veterans Administration Hospital, Denver, CO^{Note de bas de page Annexe 13 Tableau A64[b]}	1959	161	Gastroentérite (crampes abdominales, diarrhée et vomissement)	Viande de dinde cuite qui a été maintenue à la température de la pièce pendant la nuit	1
Australie^{Note de bas de page Annexe 13 Tableau A64[c]}	1976	49	Douleur abdominale, diarrhée et vomissement	Repas livrés à domicile co-contaminés avec les espèces Clostridium perfringens et B. cereus	1
Prison dans l'Ohio, États-Unis^{Note de bas de page Annexe 13 Tableau A64[d]}	1995	165	Aucune donnée	De la dinde et de la sauce étaient mises en cause	Aucune donnée
Maternelle à Split, Croatie^{Note de bas de page Annexe 13 Tableau A64[e]}	2000	12	Nausées, maux de tête et vomissements	Poudre de lait contaminé qui a été préparé deux heures avant la consommation et qui n'a pas été bouilli Co-contamination avec l'espèce B. subtilis	0

Note de bas de page Annexe A Tableau A64 a

Le terme « cas » renvoie à une personne souffrant d'intoxication alimentaire

Retour à la note de page Annexe A Tableau A64 a

Note de bas de page Annexe A Tableau A64 b

(Tong et al., 1962), bien que les auteurs définissent l'espèce B. subtilis comme étant l'agent causal, l'intoxication alimentaire a été probablement causée par l'espèce B. licheniformis, étant donné que l'apparition et les symptômes concordent mieux avec la description formulée par Lund (1990); par ailleurs, les résultats des essais biochimiques semblent être proches de ceux obtenus avec l'espèce B. licheniformis (p. ex. croissance dans le sel et croissance anaérobie).

Retour à la note de page Annexe A Tableau A64 b

Note de bas de page Annexe A Tableau A64 c

(Jephcott et al., 1977)

Retour à la note de page Annexe A Tableau A64 c

Note de bas de page Annexe A Tableau A64 d

(CDC, 1995)

Retour à la note de page Annexe A Tableau A64 d

Note de bas de page Annexe A Tableau A64 e

(Pavic et al., 2005), la contamination des aliments par les toxines des espèces B. licheniformis et B. subtilis a été confirmée par un essai de vacuolisation et un essai de culture cellulaire MTT.

Retour à la note de page Annexe A Tableau A64 e

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Date de modification :: 2015-07-31

Annexes de l'évaluation préalable finale concernant les souches

Environnement CanadaSanté CanadaAoût 2015

Annexes

Annexe 1 : Morphologies de colonies des membres du groupe B. licheniformis/subtilis inscrits à la Liste intérieure

Annexe 2 : Caractéristique des membres du groupe B. licheniformis/subtilis – Analyse de la séquence du gène de l'ARN ribosomique 16S

Annexe 3 : Caractéristiques des membres du groupe B. licheniformis/subtilis - Analyse des esters méthyliques d'acides gras (EMAG)

Annexe 4 : Contenu cellulaire de certains acides gras

Annexe 5 : Liste de certains éléments mobiles et des caractéristiques connexes identifiées dans certains isolats du complexe B. subtilis

Annexe 6 : Gènes de virulence

Annexe 7 : Essais de virulence et de pathogénicité des souches de B. licheniformis/subtilis inscrites à la Liste intérieure : Activité hémolytique

Annexe 8 : Essais de virulence et de pathogénicité des souches de B. licheniformis/subtilis inscrites à la Liste intérieure : Production de catalase

Annexe 9 : Composés antimicrobiens, autres métabolites et toxines produits par certains isolats du complexe B. subtilis

Annexe 10 : Essais de virulence et de pathogénicité des souches de B. licheniformis/subtilis inscrites à la Liste intérieure : cytotoxicité

Annexe 11 : Résultats des essais de pathogénicité, de toxicité et du pouvoir d'irritation des souches du complexe B. subtilis menés sur les vertébrés, les invertébrés et les plantes terrestres et aquatiques

Annexe 12 : Essai de virulence et de pathogénicité des souches de B. licheniformis/subtilis inscrites à la LIS

Clairance suivant l'exposition endotrachéale

Figure A-1. Dénombrement des cellules végétatives (UFC/mg) des souches du groupe B. licheniformis/subtilis inscrites à la Liste intérieure après une exposition endotrachéale

Figure A-2. Dénombrement des spores (UFC/mg) des souches du groupe B. licheniformis/subtilis inscrites à la Liste intérieure après une exposition endotrachéale

Cytokines pulmonaires

Réponse en phase aiguë

Figure A-3. Concentration d'amyloïde A (µg/mL) dans les échantillons de sérum obtenus de souris BALC/c traitées avec des cellules végétatives ou des spores des souches inscrites à la Liste intérieure

Figure A-4. Concentration d'amyloïde A (µg/mL) dans les échantillons de sérum obtenus de souris BALC/c traitées avec des spores des souches inscrites à la LIS

Annexe 13 : Éclosions d'intoxications alimentaires

Environnement Canada
Santé Canada
Août 2015